АТ и АГ к ВИЧ 1/2 (скрининг, кач.) в Анзорее

ИФА метод диагностики ВИЧ

На фото – диагностический набор

С развитием науки методы анализа продолжают совершенствоваться. Крови требуется все меньше, а результат все точнее. В настоящее время используется анализ ИФА 4 поколения на ВИЧ. Достоверность такого метода значительно выше предыдущих вариантов.

Тест на ВИЧ 4 поколения позволяет дифференцировать ответные белки на группы и определять специфику вируса.

Кроме ИФА применяется еще несколько вариантов тестирования:

• Качественный ПЦР;
• Количественный ПЦР;
• Иммуноблоттинг;

Однозначно сказать, что лучше ПЦР или ИФА нельзя, так как разные методы эффективны в разные периоды активности вируса. Для достоверного вердикта, как правило, проводятся все варианты тестов.

Важно! Если частные клиники предлагают провести дорогой, но очень точный анализ на ВИЧ пятого или шестого поколения, не стоит этому верить. В настоящее время разработан и активно используется только ИФА 4-го поколения. Анализ лучше проводить в государственном учреждении, имеющем лицензию.

Производителей реагентов для проведения Ифа достаточно много, как отечественных, так и зарубежных

Часто при обследовании у ВИЧ-положительных людей обнаруживают сопутствующие заболевания: хламидию цитомегаловирус, сифилис, трихомониаз и т.д. эти организмы могут способствовать неправильной диагностике, поэтому после лечения тест на ВИЧ повторяют.

Когда проводят ИФА

В цикле развития вируса можно выделить несколько стадий:

• Инкубационный период;
• Период острой инфекции;
• Латентный период;
• Стадия вторичных заболеваний.

На первом этапе ответная реакция не возникает, либо ее интенсивность настолько мала, что индикаторы ее не фиксируют. В это время проводить анализ нецелесообразно.

Второй период начинается примерно через 6 недель после заражения. Именно в этот срок проводят первичное обследование.

При проведении анализа важно учитывать индивидуальные особенности организма. Поэтому для получения достоверных результатов тест повторяют через 12 недель (через 3 месяца) и через 6 месяцев.

Если во все или часть указанных периодов анализ оказался положительных, назначают другой анализ на ВИЧ (иммуноблоттинг). Он должен показать степень развития заболевания и специфику его течения.

Диагностика проводится специалистами, которые знают не только как сделать забор крови для анализа, но и правильно провести диагностику, по которой потом можно сделать расшифровку

Важно! Если через несколько недель или месяцев анализ на ВИЧ оказался отрицательным, это не значит, что вируса больше нет. Анализ мог совпасть с периодом окна. В этом случае нельзя прекращать лечение и контроль за развитием заболевания.

Несмотря на высокую точность используемых методов, анализ может оказаться ошибочным из-за:

• Плохой дезинфекции медицинского инструмента;
• Ошибок персонала лаборатории;
• Неправильной подготовки пациента к сдаче крови;
• Неточная калибровка прибора и др.

Для правильного анализа важен правильно подобранный срок исследования.

Как узнать, является ли ребенок ВИЧ-положительным после появления на свет?

Определить, есть ли у ребенка вирус иммунодефицита человека, помогают анализы крови. Обычно они проводятся трижды для получения объективных результатов:

• в течение первых нескольких дней;
• в возрасте 1-2 месяца;
• в возрасте 4-6 месяцев.

Если все проведенные тесты отрицательны, у ребенка нет ВИЧ. Рекомендуется также сдать анализы по достижению ребенком 1-2 лет. Если анализы показали присутствие вируса в крови, должно быть назначено лечение антиретровирусными препаратами. Эти лекарственные средства эффективны, безопасны и помогут сохранить иммунитет малыша.

Подготовка к ИФА

Приборы, работающие с кровью, чувствительны в различным сопутствующим компонентам. Определенные вещества в крови могут привести к сбою аппаратуры и неправильному результату. Поэтому перед тем как делать анализ на ВИЧ, необходимо подготовиться.

При проведении ИФА человек должен соблюдать все правила подготовки к обычной сдаче крови:

• Перед анализом не есть жирную, сладкую пищу;
• Не курить за 12 часов до теста;
• Не перегружать организм физическими нагрузками;
• Если работа предполагает химические факторы риска, стоит взять отгул;
• Не употреблять лекарственные препараты за два дня до анализа.

Комплексы с этим исследованием

Подготовка к партнёрским родам для мужчины Анализы, необходимые для сопровождения роженицы 2 090 Р Состав
Женский чек-ап №1 38 исследований для ежегодного профилактического обследования 11 530 Р Состав

Планирование беременности. Диагностика инфекций 14 анализов для будущих мам 5 620 Р Состав

В ДРУГИХ КОМПЛЕКСАХ

• Мужской чек-ап №1 10 740 Р
• Мужское бесплодие. Расширенное обследование 18 840 Р
• Вступление в ЭКО 14 080 Р
• Будущий папа 4 870 Р
• Расширенный госпитальный комплекс 4 260 Р

Схема проведения теста

При проведении анализа порцию крови помещают в специальный аппарат и обрабатывают иммуноферментными препаратами. Это должно способствовать выделению белков р15, р17, р24, р31. Через определенное время помещают сыворотку в прибор, фиксирующий наличие иммунных клеток.

Сдача анализа на ВИЧ проводится строго натощак.

При ИФА обнаруживают не антигены вируса, а наличие антител к вирусу. Этот метод является более точным, потому что в первом случае может пройти реакция с иными вирусами в организме.

Глава 11. Диагностика ВИЧ-инфекции

Оглавление

Чтобы просмотреть текст книги нажмите на нужную главу в оглавлении

Следующая часть

Глава 12. Эффективность использования медицинской технологии

Предыдущая часть

Глава 10. Диагностика гепатита С

Внешний вид

СПИД — Синдром Приобретенного Иммунодефицита. Заболевание вирусной природы. Возбудитель болезни — Вирус Иммунодефицита Человека (ВИЧ) — ретровирус открыт в 1983 году и идентифицирован как возбудитель СПИДА. ВИЧ состоит из геномной РНК, защищенной белковыми капсидом и наружной оболочкой. Различают два подтипа ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Оболочечные белки являются основными антигенами, вызывающими иммунный ответ. Серологическая диагностика основана на специфическом обнаружении антител к белкам оболочки вируса. Самого факта обнаружения антител (как правило IgG класса) в сыворотке крови или в слюне достаточно для постановки лабораторного диагноза ВИЧ инфекции.

Главные пути передачи — половой контакт, заражение с инфицированной кровью и продуктами ее переработки, а также передача от матери плоду и новорожденному. ВИЧ после попадания в организм человека размножается, главным образом, в T4 лимфоцитах, которые играют ключевую роль в поддержании иммунологического гомеостаза человека. Снижение количества T4 лимфоцитов в результате прогрессирования болезни приводит к сопутствующим инфекциям, что, в конечном итоге, заканчивается фатальным исходом.

Передача ВИЧ от матери к плоду может происходить во время беременности, родов и при грудном вскармливании. В соответствии с приказом Минздрава России от 19.12.2003 г. № 606 обследование беременной на ВИЧ-инфекцию следует проводить двукратно: при первичном обращении по поводу беременности и в сроки 34-36 недель. Если беременная не наблюдалась у врача акушера-гинеколога, и обследование на ВИЧ во время беременности не проводилось, оно должно осуществляться с помощью Быстрых Простых Тестов при поступлении женщины на роды[161].

Остро стоящие проблемы диагностики ВИЧ-инфекции и вирусных гепатитов на ранних стадиях заражения заставляют пересматривать существующие схемы диагностики. Первоначально все обследования проводились по классической схеме: ELISA – анализ с последующим подтверждением Вестерн Блот. Дальнейшие исследования показали, что надежность результатов комбинации ELISA и/или быстрых простых тестов, таких как ИммуноКомб, агглютинационных тестов не уступает, а в некоторых случаях, при использовании быстрых простых тестов, превосходит надежность результатов комбинации ELISA / Вестерн Блот при значительно меньшей стоимости.

Впервые в 1992 году ВОЗ представила новую схему скрининга, основанную на комбинации двух отличающихся по составу антигенов ELISA и/или быстрых простых тестов, и минимизирующую использование дорогих подтверждающих тестов [162]. В 1997 году ВОЗ модифицировала эту схему включив в нее третью стратегию [163].

Выбор стратегии зависит от цели тестирования и от распространенности ВИЧ инфекции в обследуемой популяции. В этих стратегиях UNAIDS и ВОЗ рекомендуют использование комбинации быстрых простых тестов и/или ELISA тест-систем вместо комбинации ELISA\Вестерн Блот. ВОЗ неоднократно подчёркивает, что в определённых ситуациях более эффективно применение быстрых простых тестов (RST). При этом ВОЗ подчеркивает, что порядок использования и подбор наиболее подходящих Быстрых Простых Тестов в зависимости от того для каких целей они будут использованы, исключительно важен для окончательных результатов выбранной стратегии. Такой подбор может быть осуществлен на основании результатов сравнительных испытаний, которые проводятся ВОЗ с целью отбора для своих программ Быстрых Простых Тестов. Тесты, зарекомендовавшие себя не только как высоко чувствительные и специфичные, но и наиболее подходящие и удобные для постановки небольшого количества анализов, по данным испытаний ВОЗ [164, 165], сведены в таблицу 32.

Таблица 32. Быстрые простые тесты, прошедшие испытания ВОЗ

Из представленных данных видно, что наиболее подходящими для скрининга являются системы GENIE и ИммуноКомб как наиболее чувствительные и специфичные. Лучшим для обследования доноров признан тест ИммуноКомб, т.к. он является наиболее простым в применении и его специфичность выше, чем у других отобранных тестов. Более того, при тестировании сероконверсионной панели было показано, что только тест ИммуноКомб диагностирует антитела к ВИЧ-1 раньше на 8,5 дней, чем референс-тест (ELISA ENZYGNOST). Остальные тесты выявляли сыворотки данной панели позже, чем референс-тест.

В последние годы БПТ, разработанные за рубежом, появились и в России. В 1993 году был испытан и разрешен приказами МЗ РФ для обследования доноров крови, органов и тканей человека и скрининга населения единственный Быстрый Простой Тест ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2 (ЗАО «Биоград») и быстрый подтверждающий тест – Иммуноблот ИммуноКомб HIV COMBFIRM (ЗАО «Биоград»).

В 2001 году впервые в Рамках Государственных испытаний иммуноферментных тест-систем для диагностики антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 были исследованы пять БПТ, зарегистрированных МЗ РФ [13]:

• «Determine HIV 1,2», ф. Эббот лабораториес, США;
• «Genie II HIV-1 / HIV-2», ф. Био-Рад, Франция;
• «Multispot HIV-1 / HIV-2, ф. Био-Рад, Франция;
• «ИммуноКоб BISPOT HIV 1&2», ЗАО «Биоград», Россия (изготовлен из компонентов быстрого теста ф. Орженикс, Израиль);
• «ВИЧ-Экспресс», ЗАО «Вектор-Бест», Россия.

Три из пяти представленных тестов являются тестами, в основе которых лежит принцип иммунохроматографии. «ВИЧ-экспресс»- первый тест, основанный на принципе «дот-анализа», разработанный отечественными специалистами.

Среди принятых на Госиспытания, БПТ ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2 занимает особое место. Он основан на принципе твердофазного иммуноферментного анализа (иммуно-дот).

Препарат представляет собой оригинальную разработку, которая позволяет проводить иммуноферментный анализ без применения специального оборудования и с минимальным участием оператора.

Испытания БПТ проводились на стандартных панелях ГИСК им. Л.А.Тарасевича: панели из 16 сывороток, содержащих антитела к ВИЧ-1 в низких концентрациях ОСО-4228-214-02 П, панели из 20 сывороток, не содержащих антитела к ВИЧ ОСО42-28-214-02П, референс-панели сывороток, содержащих и не содержащих антитела к ВИЧ-1 (субтипы А.В.С), ВИЧ-2 ОСО 42-28-327-01.

При изучении чувствительности, которая на стандартной панели должна составлять – 100%, выявлено: тесты «Determine HIV 1/2», «Genie HIV 1/ HIV 2», «ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2» выявили все 16 сывороток стандарта ОСО 4228-212-02 П, тогда как тест «Multi Spot HIV 1/ HIV 2» не выявил – 2 сыворотки, а отечественный быстрый тест «ВИЧ -Экспресс» не выявил 15 из 16 сывороток стандарта.

При исследовании сывороток стандартной панели, не содержащих антител к ВИЧ– ложноположительные результаты были выявлены для 1 сыворотки панели (№ 11 — + сл.) при исследовании сывороток в тесте «ВИЧ – Экспресс».

Во всех анализах референс-панели были получены результаты, соответствующие исходным характеристикам сывороток, входящих в данную панель.

По результатам Госиспытаний только два БПТ – ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2 и Genie II HIV-1/ HIV-2 были рекомендованы для применения на территории России в диагностических лабораториях, для анонимных кабинетов, а также для обследования доноров крови при ургентных ситуациях.

Быстрый подтверждающий тест – Иммуноблот ИммуноКомб HIV COMBFIRM, по результатам этих же Госиспытаний, рекомендован для постановки окончательного диагноза и подтверждений наличия антител к ВИЧ (приказ 292 от 30.07.2001).

В 2003 году, согласно Указанию Зам. Министра здравоохранения РФ – Г.Г.Онищенко, были проведены очередные Государственные испытания препаратов, предназначенных для серодиагностики ВИЧ-инфекции [13].

Для изучения были предоставлены следующие П/Б-тесты:

• «Determine HIV 1/2», ф. Эббот лабораториес, США.
• «Genie II HIV-1/ HIV-2», ф. Био-Рад, Франция.
• «ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2», ЗАО Биоград, Россия.
• «Serodia – HIV 1/2», ф. Фуджеребиа, Япония.
• Ретрочек ВИЧ 1/2 WB,ф. Квалпро, Индия.

БПТ «Serodia HIV 1/2» , « Ретрочек ВИЧ 1/2 WB» участвовали в Госиспытаниях впервые. «Serodia HIV1/2» основан на латекс-агглютинации, «Ретрочек ВИЧ 1/2 WB»основан на принципе иммунохроматографии. Для Госиспытаний были использованы следующие материалы: стандартная панель сывороток, содержащих антитела к ВИЧ-1 – ОСО 42-28-212-02 П – 16 сывороток, стандартная панель сывороток, содержащих антитела к ВИЧ-2 – ОСО 42-28-216-02 – 8 сывороток, стандартная панель сывороток, не содержащих антитела к ВИЧ ОСО 42-28-214-02 П – 20 сывороток. Результаты Госиспытания БПТ представлены в табл.33

Таблица 33. Изучение 5 БПТ на стандартных панелях ГИСК им.Л.А.Тарасевича.

Как видно из таблицы 33, три БПТ – «ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2», «Determine HIV 1/2», «Serodia – HIV 1/2», выявили все 16 сывороток панели ОСО 42-28-212-02 П, тест «Genie II HIV-1/ HIV-2» — из 16 сывороток не выявил одну сыворотку — №2.

Сыворотки стандартной панели ОСО 42-28-216-02, содержащие антитела к ВИЧ-2 – 8 образцов – выявлены 4 БПТ.

Исследованные БПТ ни в одном случае не давали ложноположительных результатов при исследовании сывороток панели ОСО 42-28-214-02 П.

БПТ «Ретрочек ВИЧ 1/2 WB « был исследован на референс-панели ОСО42 -28-32704, состоящей из 24 сывороток с различной реактивностью в отношении субтипов А, В и С ВИЧ-1 и ВИЧ-2.Все сыворотки, содержащие специфические антитела были этим тестом выявлены.

Пять вышеуказанных БПТ были изучены на клиническом материале, специально отобранном для этих исследований и аттестованном предварительно методом ИФА и в иммуноблоте.

В панели клинического материала были представлены:

• Сыворотки №1Г — №12Г, содержащие антитела к ВИЧ-1 и антиген ВИЧ-1 (р24) в различных концентрациях.
• Сыворотки №1Г — №15Г – содержащие антитела к ВИЧ-1 и в отдельных образцах антиген ВИЧ-1 (р24) в различных концентрациях.
• Сыворотки беременных — №Б1 — №Б18.
• Сыворотки пациентов с диагнозом гепатит С – HCV3 – HCV8, HCV10, HCV11.
• Сыворотки пациентов с диагнозом гепатит В – HBC4 – HBC8; HBV1 – HBV12.
• Сыворотки доноров крови D1 – D34.
• Серо-конверсионная панель №9017, ф. «Партнер Бразерс», США.

Характеристика сывороток и результаты испытаний пяти БПТ представлены в таблицах 34, 35, 36.

Таблица 34. Изучение 5 БПТ на клиническом ВИЧ-позитивном материале

* — тест-система «Genscreen Plus HIV Ag/Ab» производства (ОП крит. 0,172)

** — тест-система «Genetic Systems HIV-1 Ag» производства (ОП крит. 0,101)

*** — тест-система «New Lav Blot I» производства

Как видно из таблицы 34, наилучшие результаты диагностики ВИЧ-позитивных материалов распределились среди БПТ следующим образом: «ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2», «Serodia HIV 1/2», «Детермин ВИЧ1/2», «Ретрочек ВИЧ1/2», «Genie HIV-1|HIV-2».

При использовании серо-конверсионной панели № 9017(Табл.35), наибольшее количество позитивных результатов – 6 сывороток из 11 сывороток, входящих в панель были выявлены БПТ ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2, остальные 4 теста выявили позитивными по 2 последние сыворотки из 11 сывороток, входящих в панель № 9017. Это подтверждает международные результаты о том, что среди БПТ только ИммуноКомб диагностирует ранние сероконверсионные сыворотки.

Таблица 35. Изучение 5 БПТ на сероконверсионной панели BBI № 9017

* — тест-система «Genscreen Plus HIV Ag/Ab» производства (ОП крит. 0,106)

** — тест-система «Genetic Systems HIV-1 Ag» производства (ОП крит. 0,108)

*** — тест-система «New Lav Blot I» производства

При исследовании сывороток беременных (18 образцов), сывороток крови пациентов с диагнозом гепатит В и С (25 образцов), сывороток крови доноров (34 образца) , ни в одном случае не было выявлено ложно-положительных результатов, т.е. специфичность – 100% (Табл.36).

Таблица 36. Специфичность БПТ на серонегативных сыворотках

Таким образом, результаты испытаний БПТ показали, что все исследованные препараты обладают выраженной специфичностью, что особенно важно при проведении быстрого тестирования неизвестного сывороточного материала.

Можно сказать, что БПТ гарантируют, при правильной постановке и хорошем качестве сывороток, отсутствие ложно-положительных реакций.

Большинство исследованных БПТ имеют достаточную чувствительность при диагностике антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, не уступающую чувствительности тест-систем для классического иммуноферментного анализа.

Это подтверждает предлагаемую ВОЗ концепцию стратегии, по которой в определенных случаях БПТ могут с успехом заменять классический иммуноферментный анализ. При этом постановка серологического диагноза ВИЧ-инфекции ускоряется и значительно упрощается.

Среди тест-систем, рекомендуемых МЗ РФ для постановки окончательного лабораторного диагноза и подтверждения наличия антител к ВИЧ методом иммунного блота, особое место занимает тест – иммуноблот ИммуноКомб HIV COMBFIRM, который, являясь подтверждающей системой, может быть отнесен к БПТ. Принцип анализа материала с помощью ИммуноКомб HIV COMBFIRM аналогичен ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2. Но при простоте постановки теста, он позволяет расшифровать белковый профиль ВИЧ-положительной сыворотки, подтвердив или опровергнув результаты предварительного исследования.

В 2004г. на базе спецлаборатории ГИСК им. Л.А.Тарасевича была проведена очередная переаттестация тест-системы ИммуноКомб HIV COMBFIRM для диагностики антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 методом иммуноблота (ЗАО «Биоград») [13]. Переаттестацию проводили, используя сывороточный материал стандартной панели ОСО 42-28-212-02П (серия 011) – 4 сыворотки в 2-х повторах; клинический материал – 5 сывороток с шифром Т, содержащих антитела к ВИЧ-1 от больных ВИЧ-инфекцией, 5 значений ОП; сероконверсионную панель № 9017 (Bio Clinical Partners, Inc HIV Seroconversion Panel(catalog No. HIV 9017) Franklin, MA 02038 USA). Кроме того, был дополнительно обследован клинический материал (8 сывороток), поступивший из Московского центра по СПИД и имевший по иммунному блоту (классический ИБ) – характеристику сывороток – неопределенная.

Весь клинический материал аттестован в лаборатории стандартизации и контроля МИБП против арбовирусных инфекций, риккетсиозов и СПИДа ГИСК им. Л.А. Тарасевича.

Результаты испытаний обобщены в таблице 37. При тестировании сероконверсионной панели было выявлено, что тест-система ИммуноКомб HIV COMBFIRM диагностирует антитела к ВИЧ-1 раньше на 4 дня, чем другие иммуноблоты.

Таблица 37. Результаты испытаний тест-системы ИммуноКомб HIV COMBFIRM

На основании полученных при переаттестации данных, комиссия рекомендует тест-систему ИммуноКомб HIV COMBFIRM к применению в качестве подтверждающего теста при исследовании сывороток (плазмы) крови человека на антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2.

Дифференцированную, качественную диагностику антител к вирусу иммунодефицита человека следует проводить с помощью ИФА БПТ ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2 согласно инструкции, прилагаемой к набору. Тест позволяет дифференцированно диагностировать антитела к ВИЧ 1, 0 и ВИЧ 2. Общую схему постановки анализа см. гл. 4.1, таблица 3, рисунок 3.

Результаты анализа проявляются в виде серо-голубых точек на поверхности зубца гребня. Качественная оценка результата осуществляется визуально, сравнением интенсивности окрашивания нижнего и/или среднего пятна каждого образца с интенсивностью окрашивания на зубце с положительным контролем, или автоматически на приборе КомбСкан III™ (см. 4.1.6.). Средняя точка указывает на присутствие антител к ВИЧ 2, нижняя точка – на антитела к ВИЧ1, ВИЧ0.

Специфичность теста ИммуноКомб Bispot HIV 1&2 была определена на 400 образцах нормальной сыворотки крови здоровых доноров.

Специфичность — 99,75% (один образец дал ложноположительную реакцию с ВИЧ 2).

Чувствительность – 100%. Чувствительность теста была подтверждена с использованием 8 сероконверсионных панелей, в том числе набора Societ National de Tranfusion Sanguine. Результаты согласуются с критерием чувствительности, разработанным в Laboratoire National de la Sant во Франции.

В таблице 38 приведены результаты международных испытаний БПТ ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2.

Таблица 38. Результаты международных испытаний теста ИммуноКомб BISPOT HIV 1&2

Испытания тестов ИммуноКомб показали, что этот тест корректно идентифицирует положительные результаты. Достоверность отрицательных результатов, полученных только с помощью теста ИммуноКомб ВИЧ 1+2, сравнимо с достоверностью результатов, достигнутых при комбинации 2-х или более других тестов (ELISA, иммунофлюоресцентные тесты и Вестерн-блот). Тест-системы ИммуноКомб демонстрируют высокую степень дифференциации результатов при определении антител к ВИЧ 1и ВИЧ 2. При тестировании сероконверсионной панели было показано, что ИммуноКомб определяет антитела к ВИЧ1 раньше на 8,5 дней, чем Вестерн-блот и Organon Vironostika системы.

ИммуноКомб диагностирует пересероконверсионное состояние. Отсутствуют ложно – положительные результаты при обследовании пациентов с аутоиммунными заболеваниями или с ревматоидным фактором; незначительный процент ложно-положительных результатов дают образцы от пациентов с SLE, аналогично другим широко используемыми ELISA тестам.

При всех испытаниях были подчёркнуты удобство и простота постановки анализа, а также время анализа – 37 минут.

Дифференцированное определение IgG антител к основным антигенным детерминантам вируса иммунодефицита человека типов 1 и 2 (ВИЧ1 и ВИЧ2), включая подтип 0 (ВИЧ1) в заведомо ВИЧ-положительных образцах сыворотки или плазмы крови человека следует проводить с помощью ИФА БПТ ИммуноКомб HIV COMBFIRM (иммуноблот) согласно инструкции, прилагаемой к набору. Общую схему постановки анализа см. гл. 4.1, таблица 3, рисунок 3.

Результаты анализа проявляются в виде серо-голубых точек на поверхности зубца гребня. Проявление только Внутреннего Контроля указывает, что соответствующий образец отрицателен по антителам к ВИЧ-1 и ВИЧ-2.

Образец, дающий только одну изолированную круглую окрашенную точку ВИЧ антигена или обе точки p24 и p31, но без точек на правом зубце считается сомнительным (неопределенным).

Образец, дающий, как минимум две круглых окрашенных точки ВИЧ антигена, включая одну представляющую gp41 или gp36 (рис. 14), считается ВИЧ положительным. В этих случаях ВИЧ-1 от ВИЧ-2 можно отличить следующим образом:

• Наличие точки gp41 (при отсутствии gp36) указывает на то, что образец положителен по антителам к ВИЧ-1.
• Наличие точки gp36 указывает, что образец положителен по антителам к ВИЧ-2.

Рисунок 14. Гребень Комб class=»aligncenter» width=»660″ height=»200″[/img]

Наиболее часто встречающиеся сочетания точек и их интерпретация приведены в таблице 39.

Таблица 39. Интерпретация результатов ИммуноКомб HIV COMBFIRM

Обратите внимание:

• Любая слабо окрашенная точка на зубце должна считаться положительной
• В случае неопределенного (сомнительного) результата следует взять новый образец и повторить анализ.

Чувствительность и специфичность теста по ВИЧ1 определяли в мультицентре (Франция) на 559 образцах, которые включали 154 отрицательных, 318 ВИЧ 1 – положительных, 35 положительных, согласно ELISA и неопределенных согласно Western blot, 52- положительных, согласно ELISA и отрицательных в Westetn blot. Негативные образцы включали образцы от беременных женщин, пациентов с аутоиммунными заболеваниями и гепатитами. Результаты приведены в таблице 40.

Таблица 40. Результаты исследований

*Включая 6 образцов, имеющих в Westetn blot только полосы р17 и р 55.

Исходя из этих результатов, были вычислены следующие показатели теста:

• Чувствительность – 99,7%
• Специфичность – 100%

Чувствительность и специфичность по ВИЧ 2 определялась на 192 образцах от пациентов из африканских стран, которые включали 48 ВИЧ отрицательных, 51 ВИЧ1 положительных, 84 ВИЧ 2 положительных и 9 с ВИЧ1 и ВИЧ2. Результаты приведены в таблице 41.

Таблица 41. Результаты исследований

Исходя из этих результатов, были вычислены следующие показатели теста:

• Чувствительность –100%
• Специфичность – 100%

Расшифровка результатов ИФА

После анализа крови на ВИЧ может получиться несколько вариантов результатов:

• Положительный;
• Отрицательный;
• Ложноположительный;
• Ложноотрицательный;
• Сомнительный.

Если иммуноферментный тест на ВИЧ положительный, значит у человека есть заболевание. Все остальные значения результатов исследования означают, что анализ необходимо повторить или переделать, так как результат неточный.

Точность иммунодефицитного результата зависит от:

• Правильности калибровки прибора;
• Правильной дезинфекции оборудования;
• Подготовки пациента к анализу;
• Соответствии действий персонала технике проведения анализа.

При слабом иммунном ответе результат выдается сомнительный. Это значит, что вирус есть, но его количество слишком мало, что может быть следствием плохой очистки прибора от предыдущего исследования. В этом случае тест проводится повторно.

Важно! Только метод ИФА может показать причину смерти от ВИЧ, так как белок еще находится в организме. Сам вирус быстро погибает при гибели носителя, поэтому другие методы диагностики не работают.

Если анализ ИФА положительный

Когда человек получает положительный анализ ИФА на ВИЧ, необходимо сразу обратиться к лечащему врачу. Поставить окончательный вердикт о наличии или отсутствии ВИЧ инфекции может только врач специалист на основании точного исследования. Во всех случаях, когда ИФА положительный, назначают повторный анализ ПЦР на определение количества вируса. По комплексу данных врач делает вывод о скорости течения заболевания и особенностях развития вируса.

Совет! Нельзя забрасывать дальнейшее обследование при первом положительном результате. Иногда такой результат дает неправильная подготовка и проведение теста.

Что делать при положительном ИФА

Если анализ показал наличие вируса, то рекомендуется сделать второй анализ

Результаты ИФА считаются достоверными только после повторного проведения анализа и подтверждении результата.

При получении положительного теста необходимо проконсультироваться в врачом. Если из ряда тестов положительным оказался только один, анализ стоит повторить через несколько недель для получения достоверных данных.

Причиной ошибочного результата могут быть следы крови от предыдущего анализа.

Осложнения при анализах

Многие заболевания могут способствовать получению недостоверных данных:

• Заболевания щитовидной железы;
• Хронические простудные заболевания;
• Наличие паразитов.

Такие отклонения в здоровье не позволяют обнаружить вирусный след методом ИФА. Пациентам назначаются другие виды диагностики.

Что делать если показал отрицательный результат

Не стоит забывать, что срок сдачи анализа может попасть на время серонегативного окна, когда активность вируса снижена и он не определяется. Для того чтобы получить достоверный результат, необходимо провести повторный анализ через несколько недель.

Для анализа нельзя приносить кровь с собой, так как белок, который выявляют при ИФА быстро денатурирует, что поспособствует получению отрицательного результата.

Один из способов обнаружения клеток вируса в период окна это ПЦР. Перед этим анализом проводится полимеразно-цепная реакция, увеличивающая количество РНК-отрезков, что позволит сделать препарат более доступным для анализа.

Подробное описание исследования

ПРАВИЛА ПРОВЕДЕНИЯ ОБСЛЕДОВАНИЯ НА ВИЧ-ИНФЕКЦИЮ

Первичный этап (скрининг) исследования на ВИЧ.

Внимание! При сдаче исследования АТ и АГ к ВИЧ 1/2 для первичного скрининг исследования в соответствии с законодательством РФ обязательно предоставление следующих данных и документов:

1) Для жителей Москвы и Московской области

• Фамилия, имя, отчество
• День, месяц и год рождения
• Сведения о регистрации
• Паспорт

2) Для жителей других регионов РФ и иностранных граждан дополнительно – ксерокопию (скан) паспорта.

• Фамилия, имя, отчество
• День, месяц и год рождения
• Сведения о регистрации
• Паспорт

В случае не предоставления указанной выше информации, для пациентов с предварительными положительными и сомнительными результатами скрининг исследования АТ и АГ к ВИЧ ½ (скрининг) (кач.), результат исследования не может быть выдан.

Анализ можно сдать анонимно: при этом пациент регистрируется как аноним с индивидуальным номером заказа (п.2, ст.8 ФЗ РФ № 38-ФЗ), при обязательном указании года рождения и места жительства (субъект РФ).

Обращаем Ваше внимание! Что результаты первичного (скрининг) исследования являются только результатами лабораторного исследования и не являются результатом освидетельствования или заключением о наличии или отсутствии ВИЧ-инфекции. По результатам скрининг исследования следует обратиться в муниципальный центр-спид для проведения добровольного освидетельствования на наличие ВИЧ.

Результаты исследования на ВИЧ независимо от их результата выдаются только при личном обращении пациента в лабораторное отделение. При обследовании несовершеннолетних (до 14 лет) детей — законному представителю, указанному в заказе.

Результаты выдаются при предъявлении договора, сметы и документа, удостоверяющего личность самого пациента или представителя пациента, указанного в заказе.

По телефону и электронной почте результаты исследований не сообщаются.

С помощью данного теста исследуемые образцы сыворотки/плазмы крови можно одновременно протестировать на наличие антигена ВИЧ 1 и 2 типов и антител к ВИЧ 1 и 2 типа.

Вирус иммунодефицита человека относится к семейству РНК-содержащих ретровирусов и подсемейству лентивирусов, т.е. вирусов медленных инфекций. ВИЧ генетически и антигенно неоднороден, по своей структуре разделяется на 1 и 2 тип. При внедрении в клетки человека вирус образует в их геноме участок ДНК, который в дальнейшем образует новые ВИЧ в неограниченном количестве. На поверхности поврежденных клеток появляются антигены вируса. Ответом на их появление со стороны иммунной системы является образование специфических антител к вирусу первого или второго типа. За последние три года число официально зарегистрированных в России ВИЧ-инфицированных лиц растёт в геометрической прогрессии. Стремительное распространение ВИЧ-инфекции в стране может приобрести неконтролируемый характер. Поэтому одной из главных задач в настоящее время является использование более совершенных методов её диагностики, обеспечивающих выявление заражённых лиц на самых ранних стадиях инфекции. К таким методам относятся лабораторные серологические тесты, определяющие как белковые структуры вируса, так специфические антитела к вирусу.

Беременность и ИФА

Для медицинских работников анализ крови беременных является не только очень сложным, но и самым ответственным

Чтобы избежать вертикальное заражение плода от инфицированной матери, всем женщинам во время беременности назначается ИФА-анализ на ВИЧ. Кровь берется в начале беременности вместе с другими анализами. В некоторых случаях, при сомнительном результате, или если женщина находится в постоянном контакте с ВИЧ-положительным партнером, наблюдение ведется в течении всей беременности.

Если с помощью тестов у женщины выявляется ВИЧ, в лаборатории проводится повторный анализ.

При достоверном положительном результате женщине назначается легкая антиретровирусная терапия с целью предотвращения возможного заражения плода.

Важно! Если во время беременности выявляется ВИЧ у женщины, это не значит, что ребенок будет гарантировано ВИЧ-положительным. При своевременном обращении к врачу, грамотном применении препаратом и постоянном наблюдении ребенок родится здоровым. Здоровье ребенка во многом зависит от грамотного поведения мамы!

Анализы крови на ВИЧ у новорожденного ребенка

Ребенок, рожденный от ВИЧ-положительной матери, с момента появления на свет дает отрицательный результат при тестировании. Это является нормой, ведь ему передаются антитела матери на физиологическом уровне для создания защитного барьера от инфекции.

Белки, которые определяет скрининг-система, уходят из поля видимости примерно к 1,5 годам. Положительный результат ПЦР-анализа может свидетельствовать о возможном заражении ребенка, однако для окончательной установки диагноза важно полное обследование на базе СПИД-центра.

Самым лучшим исходом событий после родов считается отрицательный ПЦР у ребенка на следующий день после рождения от ВИЧ-положительной матери. Этот результат подтверждает, что передачи ВИЧ во время беременности не было. Если такой же ответ при использовании ПЦР будет получен в 1 месяц жизни, это станет показателем того, что инфицирования не было и при родах. В среднем достоверность таких данных составляет 93%.

Если в период с 4 до 6 месяцев ПЦР показывает еще один отрицательный результат ― вероятность отсутствия вируса в крови ребенка максимально приближена к 100%. Чтобы полностью исключить риски, достаточно провести 2 и более исследования крови после 1 месяца, а также сделать 2 скрининга после исполнения года. Также должно отсутствовать грудное вскармливание на протяжении последних 12 месяцев.