Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг

Подробное описание исследования

В норме иммуноглобулины, или антитела, служат для защиты от микроорганизмов, чужеродных веществ и их возможного отрицательного воздействия на организм. Антитела синтезируются особым типом лимфоцитов — плазмоцитами и делятся на пять основных классов, которые обычно обозначаются как IgA, IgG, IgD, IgE и IgM. Они отличаются по своей структуре, концентрации в крови и выполняемым функциям.

При аутоиммунных заболеваниях организм вырабатывает патологические иммуноглобулины (аутоантитела). Они запускают каскад реакций, направленных на разрушение собственных клеток и тканей. Причины и точные механизмы этого процесса до конца неизвестны. Однако выделяют ряд предрасполагающих факторов, к которым, например, относится генетическая предрасположенность: наличие аутоиммунной патологии у кровных родственников.

Антинуклеарный фактор — это группа антител к компонентам ядра клетки, которая служит маркером наличия аутоиммунных заболеваний. К которым относятся:

1. Системная красная волчанка (СКВ);
2. Синдром Шегрена;
3. Системная склеродермия;
4. Смешанные заболевания соединительной ткани (СЗСТ), или синдром Шарпа;
5. Воспалительные миопатии (полимиозит, дерматомиозит).

Исследование заключается в определении патологических иммуноглобулинов, которые взаимодействуют с компонентами клеточного ядра: с ДНК, РНК и белками. Поэтому эти иммуноглобулины называются антинуклеарными антителами (АНА), а их совокупность — антинуклеарный фактор (АНФ).

Особенность теста состоит в том, что в качестве субстрата для иммунного ответа используется специальная культура HЕp-2 клеток, изначально полученная из раковых клеток гортани. Клетки HЕp-2 имеют крупное, хорошо различимое под микроскопом ядро и всегда располагаются на предметных стеклах в один слой.

В ходе исследования выделяют 6 типов свечения: гомогенное, периферическое, крапчатое, сетчатое крапчатое, дискретное крапчатое и нуклеолярное. Характер свечения отражает присутствие различных типов антиядерных антител. Тип свечения антител имеет связь с той или иной ревматической патологией, поэтому позволяет уточнить диагноз.

Определение антинуклеарного фактора с применением специальной культуры клеток HЕp-2 и определением 6 типов свечения необходимо в рамках диагностического поиска при подозрении на ревматологические заболевания. Для ряда заболеваний данный тест рассматривают как один из обязательных критериев диагноза.

Чувствительность метода для выявления ревматических заболеваний имеет высокий процент, который для системной красной волчанки составляет 93%.

В лаборатории «Гемотест» антинуклеарный фактор на клеточной линии HЕp-2 с определением 6 типов свечения определяется с помощью современного и точного оборудования и является достаточно доступным по цене.

Антинуклеарный фактор на клеточной линии HEp-2 (АНФ)

Антинуклеарный фактор на клеточной линии HEp-2 (АНФ)

— это тест для выявления антинуклеарных антител методом непрямой иммунофлюоресценции. При системной красной волчанке (СКВ) и других системных ревматических заболеваниях, иммунный ответ направлен против нуклеопротеиновых антигенов, т.е. комплексов нуклеиновых кислот и белков. Эти эндогенные нуклеопротеиновые комплексы образуются в ходе процесса апоптоза эпителиоцитов и напоминают чужеродные вирусные частицы. Ускорение процессов апоптоза под действием ультрафиолетового облучения, вирусных инфекций и лекарственных препаратов, запускает аутоиммунные ответы при СКВ. При апоптозе основные антигены антител конденсируются в апоптотических тельцах, которые становятся мишенью для аутоантител. В настоящее время описаны около 200 разновидностей антител к нуклеопротеинам и рибонуклеиновым кислотам, которые получили название антинуклеарные антитела. При аутоиммунных заболеваниях аутоантитела к ядерным антигенам не обладают прямым цитотоксическим действием на клетки человека, однако иммунные комплексы способны запускать иммунологическое воспаление особенно в местах, где сосуды особенно тонки, в том числе в почках, коже, ЦНС, синовиальной оболочке суставов, плевре.

Исследование антинуклеарного фактора (АНФ) представляет собой основной метод выявления антинуклеарных антител, позволяя выявлять аутоантитела к нуклеиновым кислотам (дсДНК, осДНК, РНК), рибонуклеопротеинам, а также большинству конформационных и нерастворимых антигенов.

Антинуклеарные антитела обнаруживаются благодаря их связыванию с внутриклеточными антигенами перевиваемой линии клеток эпителия человека (HEp-2). Ядро и цитоплазма клеток НЕр-2 содержит все антигены, характерные для человеческого организма, что позволяет выявлять в одном тесте все основные антинуклеарные антитела. Метод непрямой иммунофлюоресценции на клеточной линии НЕр2 рекомендован в качестве золотого стандарта выявления антинуклеарных антител ведущими европейскими (EASIgroup2010) и американскими экспертами (ACRANATaskforce2008). В силу многообразия антигенов антинуклеарных антител, не все они могут быть очищены или синтезированы для использования в иммуноферментных тестах по выявлению антинуклеарных антител.

Позитивность по АНФ на клеточной линии НЕр-2 отмечается при системной красной волчанке (СКВ), системных ревматических заболеваниях и многих аутоиммунных заболеваниях, что делает его универсальным тестом в обследовании больных с аутоиммунной патологией. Положительный результат АНФ отмечается более чем у 90% больных с диффузными болезнями соединительной ткани, такими как системная красная волчанка и кожные формы этого заболевания, склеродермия и ее разновидности, смешанное заболевание соединительной ткани, синдром Шегрена. Выявление АНФ имеет большое значение в диагностике ювенильного ревматоидного артрита и аутоиммунных заболеваний печени. Представители этого семейства аутоантител могут быть обнаружены при множестве других аутоиммунных (тиреоидит, диабет), инфекционных (вирусный гепатит), воспалительных и онкологических заболеваний. Встречаемость АНФ достигает 1–3% у клинически здоровых людей и несколько возрастает у лиц старше 65 лет. Лица с высокими титрами АНФ имеют повышенный риск развития аутоиммунных заболеваний.

Показания:

• Системная красная волчанка.
• Подострая кожная волчанка и другие разновидности кожной волчанки.
• Смешанное заболевание соединительной ткани.
• Синдром Шегрена и ассоциированные заболевания.
• Диффузная и локализованная склеродермия, CREST-синдром.
• Воспалительные миопатии (полимиозит и дерматомиозит).
• Ювенильный хронический артрит.
• Аутоиммунный гепатит.
• Первичный билиарный цирроз и склерозирующий холангит.
• Полинейропатии и миелит.

Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак или спустя 4–6 часов после последнего приема пищи. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Интерпретация результатов

Единицы измерения: титр.

Референсные значения: <1:160 (отрицательно).

Результатом определения АНФ является титр, представляющий собой значение конечного разведения сыворотки при котором сохраняется значимая флюоресценция ядра. Чем выше знаменатель дроби, тем больше разведение сыворотки, тем больше антител в сыворотке больного. Высокие титры разведения сыворотки отражают высокую аффинность и концентрацию аутоантител.

Выявление высоких тиров (1/640 и выше) указывает на высокую вероятность системного ревматического заболевания или аутоиммунного заболевания печени и требует внимательного клинического, лабораторного и инструментального обследования. Отсутствие повышенных титров антинуклеарного фактора значительно снижает вероятность системных аутоиммунных заболеваний.

В низких титрах (до 1/160) антинуклеарный фактор может отмечаться у 1–2% здоровых лиц и родственников больных с системными заболеваниями. Частота положительных титров в популяции несколько увеличивается с возрастом. Низкие титры антинуклеарных антител могут встречаться при многих аутоиммунных, инфекционных и онкологических заболеваниях. Отсутствие высоких титров антинуклеарных антител значительно снижает вероятность системного ревматического процесса и может использоваться скорее для исключения, чем подтверждения диагноза.

Использованная литература

1. Федеральные клинические рекомендации. Лабораторная диагностика ревматических заболеваний. Москва, 2014.
2. Ревматология : национальное руководство / под ред. Е.Л. Насонова, В.А. Насоновой. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. — 720 с.
3. Лапин, С.В., Тотолян, А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. — СПБ.: Человек, 2010. — 272 с.
4. Лапин, С.В. Выявление антинуклеарных антител: международные рекомендации и собственный опыт, 2014.
5. Ревматические болезни: номенклатура, классификация, стандарты диагностики и лечения / под ред. В.Н.Коваленко, Н.М Шуба. — М.: Катран груп, 2002. — 214 с.

Антиперинуклеарный фактор, IgG

Общая информация об исследовании

Антиперинуклеарный фактор (АПФ) – разновидность аутоантител, направленных против цитруллинсодержащих белков. К антицитруллиновым антителам также относятся антикератиновые антитела (АКА) и антитела к центральному цитруллинсодержащему пептиду (АЦЦП), которые являются маркерами ревматоидного артрита (РА) и часто определяются одновременно.

Ревматоидный артрит (РА) – хроническое системное аутоиммунное заболевание. Для него характерны воспаление, боль, скованность, деструкция и деформация пораженных суставов. Чаще всего он обнаруживается у женщин в 40-60 лет. В патологический процесс могут вовлекаться любые суставы. Заболевание может быстро прогрессировать, вызывать значительные изменения в суставах или в течение многих лет пребывать в ремиссии (период временного ослабления). Ранняя диагностика РА и своевременное начало лечения очень важны, так как при бездействии он грозит ограничением физической активности, инвалидностью и даже сокращением продолжительности жизни.

АПФ, как и другие антицитруллиновые антитела, связывает филаггрин, антигенные свойства которого обуславливает цитруллин. Цитруллин относится к нестандартным аминокислотам, он не входит в состав синтезируемых белков и не способен образовываться в процессе модификации аргинина. Реакция цитруллинирования – образование цитруллина – играет важную роль в клеточной дифференциации и апоптозе (запрограммированной гибели клеток). Патогенетическое значение антицитруллиновых антител в развитии ревматоидного артрита не до конца изучено и, вероятно, связано с накоплением цитруллина в воспаленной синовиальной оболочке, запуском апоптоза и перекрестными иммунологическими реакциями.

Антиперинуклеарный фактор был впервые описан Ниенхайсом и Мандемой в 1964 году как специфический маркер ревматоидного артрита. Он выявляется с помощью реакции непрямой иммунофлюоресценции в кератогиалиновых гранулах, окружающих ядро клеток эпителия щеки человека. При этом под микроскопом определяется специфическое свечение округлых гранул (3-8 на клетку), расположенных вокруг ядра.

Для АПФ характерна более высокая специфичность, чем для ревматоидного фактора (РФ), но более низкая чувствительность. Уровень АПФ не взаимосвязан с титрами РФ, что позволяет использовать данный тест при серонегативном РА в качестве независимого маркера. Этот анализ имеет большое значение в диагностике раннего РА. Чувствительность АПФ составляет 53-68 %, специфичность – 91-95 %.

Тест на антиперинуклеарный фактор часто назначается одновременно с анализом на антикератиновые антитела. АПФ и АКА встречаются достоверно чаще РФ в дебюте РА, отмечаются у 38 % больных с серонегативным РА.

АПФ и другие антицитруллиновые антитела обнаруживаются у больных с большей активностью заболевания, агрессивным течением РА и выраженным суставным синдромом, более высокими параметрами функциональной недостаточности, прогрессирующими рентгенологическими изменениями и резистентностью к базисной терапии.

АПФ в некоторых случаях может быть положительным у здоровых людей, у людей с другими аутоиммунными заболеваниями, поэтому результаты теста следует оценивать в комплексе с анамнезом и симптомами, а также с данными других анализов и инструментальных методов обследования.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики раннего ревматоидного артрита.
• Для диагностики серонегативного ревматоидного артрита.
• Для дифференциальной диагностики заболеваний с поражением суставов.
• Для составления прогноза ревматоидного артрита.

Когда назначается исследование?

• При симптомах ревматоидного артрита (отечности, болезненности суставов кистей, скованности в движении воспаленных суставов, повышении температуры тела, подкожных ревматических узелках).
• При обследовании пациента с суставным синдромом неясного происхождения.
• При отрицательном ревматоидном факторе у пациента с суставным синдромом.
• При обследовании пациента с рентгенологическими признаками эрозий суставных поверхностей костей.