ПЦР-анализ на ИППП (половые инфекции)

Подробное описание исследования

Комплексное исследование мазка из урогенитального тракта для количественного определения самых распространенных и опасных венерических инфекций: нейссерия гонореи, хламидия трахоматис, микоплазма гениталиум, трихомонас вагиналис. Присутствие данных патогенов в организме требует обязательного лечения.

Исследование проводится методом ПЦР. ПЦР (полимеразная цепная реакция) – самый быстрый и достоверный метод диагностики инфекционных заболеваний. Чаще всего его используют для выявления инфекций передающихся половым путем (ИППП), ПЦР диагностика эффективна для обнаружения микроорганизмов трудно выявляемых в лабораторных условиях, атипичных форм бактерий, внутриклеточных паразитов и микроорганизмов, способных длительно существовать в организме хозяина и вызывать хронические заболевания.

В комплексе проводится исследование следующих патогенных микроорганизмов:

1. Трихомонада вагиналис – возбудитель урогенитального трихомоноза. Этот анаэробный паразит обитает в мочеполовом тракте мужчин и женщин, причем у женщин влагалищная трихомонада обнаруживается чаще. Мужчины, в основном, являются носителями трихомонадной инфекции. Основное место обитания урогенитальной трихомонады в мужском организме — уретра, предстательная железа и семенные пузырьки, в женском — влагалище, шейка матки и уретра.
2. Хламидия трахоматис – облигатные внутриклеточные паразиты, передающиеся преимущественно половым путём, и вызывающие хламидиоз (в первую очередь, поражения слизистых оболочек половых путей, конъюнктивиты). Достаточно широко распространённая инфекция, может протекать бессимптомно, часто хронизируется, сопровождается различными осложнениями, которые иногда у женщин являются причиной бесплодия и невынашивания беременности.
3. Микоплазма гениталиум – патогенный микроорганизм, вызывает заболевания мочеполового тракта. Микоплазмы передаются при половых контактах, могут являться причиной негонококкового уретрита и простатита, воспалительных заболеваний малого таза, патологии беременности и плода, бесплодия у женщин и мужчин.
4. Нейсерия гонореи – это грамотрицательная бактерия, относящаяся к диплококкам и вызывающая самое распространенное венерическое заболевание – гонорею. Поражает слизистые оболочки мочеполовой системы как у мужчин, так и у женщин. Новорожденные могут заразиться гонореей при прохождении ребёнка через родовые пути (бленнорея новорожденных).

Возможно проведение исследования по урогенитальному мазку, мазку с коньюнктивы глаза, ротовой полости. Урогенитальный мазок берется у мужчин- из мочеиспускательного канала, у женщин из влагалища, уретры, цервикального канала. В ЛО Гемотест по умолчанию взятие мазка производится из цервикального канала. Мазок с коньюктивы глаза берется профильным специалистом(офтальмологом).

ПЦР-анализ

В зависимости от поставленной задачи, материалом для ПЦР-диагностики могут служить:

• соскобы эпителиальных клеток (кожные покровы, слизистая уретры, цервикального канала, др.);
• смывы с конъюнктивы и др.;
• кровь, биологические жидкости (сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкости, др.);
• моча, мокрота,слюна, слизь и другие биологические выделения;
• биоптаты органов.

Как правильно подготовиться к ПЦР-анализу (ДНК-диагностике)

Достоверность результатов лабораторной диагностики зависит не только от опыта и профессионализма врача-лаборанта, возможностей данной лаборатории, но и от того, соблюдал ли пациент рекомендации врача, насколько правильной была его подготовка к проведению анализа. Ничего сложного в правильной подготовке нет.

При сдаче анализа методом ПЦР врачи рекомендуют соблюдать следующие инструкции:

Кровь

Сдача ПЦР анализа крови проводится натощак, т.е. необходимо ничего не есть, не пить и не жевать жвачку. Забор крови проводится из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в специальную вакуумную пробирку типа Vacutainer (крышка сиреневого цвета, в качестве консерванта — ЭДТА). Запрещается использовать другие вещества в качестве антикоагулянта.

Пробирка закрывается пробкой и переворачивается несколько раз (для перемешивания с антикоагулянтом). Пробирку с кровью до исследования хранят в холодильнике при +4°С.

Максимальный срок хранения: при исследовании на вирусные гепатиты до 2 суток, при исследовании на другие инфекции до 5 часов (при +4°С, или 1 мес. при -20°С).

Моча

Для анализа отбирается первая порция утренней мочи в количестве 10-50 мл в специальный флакон или пробирку без консервирующего раствора.

Максимальный срок хранения отобранного материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Слюна

Перед забором слюныпроизводится трехкратное полоскание полости рта физиологическим раствором. Забор слюны производится в одноразовые пробирки в количестве 3-5 мл. Материал необходимо отбирать непосредственно перед исследованием и немедленно доставлять в лабораторию. При невозможности быстрой доставки материал замораживают при -20°С. Последующая транспортировка осуществляется в замороженном виде (в термосе со льдом).

Мазок из ротоглотки

Мазок материала производится рабочей частью стерильного одноразового аппликатора с задней стенки глотки и крипт миндалин. После забора материала аппликатор помещают в стерильную одноразовую пробирку.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Мокрота и плевральный выпот

Материал отбирают в специальные флаконы в количестве 5-10 мл.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Биопсийный материал

Материал помещают в сухую одноразовую пробирку типа Eppendorf.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Синовиальная жидкость

Забор материала производится одноразовым шприцом в количестве 1 мл. Отобранный материал помещают в сухую одноразовую пробирку типа Eppendorf.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Забор материала для анализа на урогенитальные инфекции

За сутки до проведения анализа не жить половой жизнью.

Не мочиться за 1-2 часа до забора материала.

У женщин забор материала производится из трех различных точек: цервикальный канал, задний свод влагалища, уретра. При необходимости материал для исследования берется из генитальных язв (исследование на HSV-I/II, Haemophilusducrei). Забор производится универсальным зондом или ложкой Фолькмана. Не допускается наличие в мазке крови или слизи.

Если соскоб взят универсальным зондом, рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал, отрезается или обламывается и помещается в одноразовую пробирку типа Eppendorf с консервирующим раствором (транспортной средой). Если забор материала производится ложкой Фолькмана, рабочая часть инструмента споласкивается в консервирующем растворе (транспортной среде), содержащимся в одноразовой пробирке Eppendorf.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С или 1 мес. при -20°С.

Забор материала у мужчин производится универсальным зондом или цитощеткой из уретры. Обычно перед процедурой уретру обрабатывают физраствором. При необходимости материал для исследования берется из генитальных язв.

В случае забора материала универсальным зондом, рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал, отрезается или обламывается и помещается в одноразовую пробирку Eppendorf с консервирующим раствором (транспортной средой). После взятия материала цитощеткой, она опускается в пробирку Eppendorf с консервирующим раствором (транспортной средой), несколько раз ротируется, а затем удаляется из пробирки. Не допускается наличие в мазке крови.

Максимальный срок хранения материала 1 сутки в холодильнике при +4°С или 1 мес. при -20°С.

Сок предстательной железы после пальцевого массажа предстательной железы и в количестве 0,5-1,0 мл собирают в сухую пробирку типа Eppendorf. При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи (в которой содержится сок предстательной железы) в количестве 10 мл (правила забора мочи смотри выше).

Срок проведения

Результат ПЦР-диагностикиобычно можно получить через 2-3 рабочих дня после сдачи анализа.

Возможно получение результатов ПЦР-теста в течение одного рабочего дня.

Что такое ПЦР?

Полимеразная цепная реакция, ПЦР (англ. — PCR — polymerase chain reaction) не сходит с заголовков статей научных журналов с тех пор, как была открыта Кэри Б. Мюллисом в 1983 году, за что он был удостоен Нобелевской премии.

ПЦР

— это метод, который позволяет найти в исследуемом клиническом материале небольшой участок генетической информации (ДНК) инфекционного возбудителя и многократно размножить его.

В диагностике инфекций передаваемых половым путем (ИППП) также используются следующие методики:

• микроскопия
  — исследование неокрашенных и окрашенных препаратов в светооптическом микроскопе. Точность метода зависит от опыта врача-лаборанта. Как правило хорошо диагностируются гонококки, трихомонады, гарднереллы и кандиды (бактерии больших размеров). Другие инфекции не видны под микроскопом, так как очень маленького размера.
• бактериология
  — культивирование (выращивание) инфекций на питательных средах. До практического использования ПЦР, бактериальное исследование считалось «золотым стандартом» в диагностике ИППП, т. е. самым точным методом. Большим плюсом данной методики является возможность определения чувствительности микробов к антибиотикам. Минусом — необходимость быстрой доставки клинического материала в лабораторию, пока микробы не погибли в окружающей среде, не все ИППП растут на питательных средах, необходимость использования качественных питательных сред, сроки получения результатов — 5 — 7 дней.
• иммуноферментный анализ
  — определение специфических антител (белков), вырабатываемых в ответ на внедрение микробов (антигенов) в сыворотке крови. То есть выявляют не сам микроб, а антитела которые вырабатывает организме человека. Плюсом метода является возможность определение стадии инфекционного процесса (в острой стадии определяются иммуноглобулины (антитела) класса М, в хронической — иммуноглобулины класса G). Минусом — отсутствие выработки антител у пациентов с иммунодефицитом, перекрестная реакция антител со схожими микробами, низкие показатели чувствительности и специфичности. На основании результатов только ИФА без подтверждения другими методами диагностики и при отсутствии клинических проявлений выставлять диагноз не представляется возможным.

В настоящее время ПЦР является самым точным методом диагностики инфекционных заболеваний. Точность любого метода диагностики в медицине оценивается такими понятиями как чувствительность и специфичность.
Чувствительность

— процент положительных результатов среди обследованных инфицированных лиц. Это значит, что при обследовании 100 человек больных хламидиозом методом ПЦР диагноз будет подтвержден у 98-99 человек, а у 1-2 человек из 100 будет установлен ложноотрицательный результат. Чувствительность ИФА в диагностике инфекций передаваемых половым путем — 50-60%. Это значит, что у 40-50 людей из 100 больных хламидиозом возможен ложноотрицательный результат.

Специфичность

— процент отрицательных результатов среди обследованных здоровых лиц. Это значит , что при обследовании 100 здоровых людей на хламидии методом ПЦР у 97-98 обследуемых покажет отрицательный результат, а у 2-3 человек возможен ложноположительный результат. Специфичность ИФА составляет 60-70%.

Ниже приведены показатели чувствительности и специфичности методов диагностики инфекций передаваемых половым путем.

Как видно из таблицы метод ПЦР обладает наилучшими результатами в диагностике инфекции передаваемых половым путем. Именно поэтому можно получить разные результаты исследования у одного человека, если он обследован разными методами диагностики. Но приоритет всегда должен отдаваться ПЦР, как самому точному из всех.

На сегодняшний день существует 2 методики ПЦР-анализа: так называемая «форезная» и «ПЦР в реальном времени» (более современная).

Основным приемуществом методики ПЦР в реальном времени по сравнению с форезом является:

• сведение к минимуму риска контаминации (загрязнение) лаборатории и связанных с ней ложно-положительных результатов и артефактов ПЦР-анализа
• упрощение требований к организации лаборатории — отсутствует необходимость в изолированном дополнительном помещении для проведения этапа детекции и отдельного врача -лаборанта
• автоматический анализ результатов с помощью компьютера, стандартизация результатов, исключение субъективности результатов (при форезной методике результат исследования определяется врачем-лаборантом, а при ПЦР в реальном времени — компьютером)
• возможность количественной оценки содержания ДНК возбудителя в клиническом образце

Несмотря на высокую точность анализов, не редки случаи получения противоположных результатов в разных ПЦР-лабораториях. Это объясняется многими факторами. Критериями качественной работы лаборатории является:

• использование сертифицированных тест — систем, обладающих высокой аналитической чувствительностью
• использование внутренних и внешних контролей работы лаборатории
• высокая воспроизводимость результатов (95 — 98%)
• современное оборудование
• квалифицированные специалисты
• борьба с контаминацией (загрязнением лаборатории продуктами амплификации)
• правильное расположение «рабочих» зон лаборатории
• при наличии сомнительных результатов и артефактов ПЦР-анализа — их перестановка на различных этапах
• архивирование результатов исследований с возможностью их просмотра в спорных случаях.

Таким образом, только сочетание грамотного специалиста и качественно работающей лаборатории могут обеспечить постановку правильного диагноза и как следствие быстрого и полного выздоровления. Если возникает несоответствие клинической картины с результатами лабораторных исследований, необходимо повторное проведение анализов. Единственное нужно понимать, что подтвердить диагноз, поставленный методом ПЦР, можно только методом ПЦР, выполненным в другой лаборатории или повторно в этой же, так как другие способы диагностики сильно уступают вышеуказанному методу диагностике.

Если вы хотите сдать ПЦР-анализы и получить профессиональную диагностику, то специалисты нашей клиники готовы оказать вам действительно качественные услуги.

Показания к проведению процедуры (мазка на флору)

Показаниями для сдачи общего мазка есть:

• планирование зачатия ребенка;
• беременность женщины;
• плановое обследование у врача;
• терапия гормонами, антибиотиками, цитостатиками, кортикостероидами, противоопухолевыми лекарственными средствами длительный период времени;
• боль в нижней части живота;
• обильные выделения из влагалища;
• зуд и боль во время полового акта.

Гинекологи рекомендуют сдавать мазок на флору при смене полового партнера и болевых ощущениях во время интимной близости с мужчиной. Анализ нужен для того, чтобы диагностировать гинекологические заболевания половой сферы и обнаружить воспалительные процессы на ранних стадиях. Желательно посещать врача раз в полгода, чтобы произвести профилактический осмотр и сдать наиболее важные анализы.