Вирус гепатита С, РНК HCV (колич.) ультрачувствительный

Подробное описание исследования

Лабораторное исследование для качественного определения РНК вируса гепатита С в плазме крови методом полимеразной цепной реакции в реальном времени. Рекомендовано в качестве подтверждающего исследования при положительном результате серологического скрининга. Возможно использование с целью ранней диагностики (через 2 недели после инфицирования).

Гепатит С – это инфекционное заболевание печени, развивающееся в результате заражения вирусом гепатита С (ВГС). Источником инфекции служит больной человек. Вирус передается гемотрансмиссивным путем, то есть при контакте поврежденных тканей здорового человека с незначительным количеством крови больного. Вакцины против ВГС не существует.

Передача вируса возможна:

• при половом контакте;
• при нанесении татуировок;
• при использовании многоразовых медицинских инструментов, не прошедших надлежащую обработку;
• при инъекционной форме употребления психоактивных веществ;
• при переливании крови;
• во время беременности и родов от инфицированной матери ребенку.

Основная мишень вирионов – клетки печени (гепатоциты). Вирус соединяется с мембраной клетки с последующим высвобождением собственного генетического материала – молекулы РНК – в цитоплазму клетки. После этого в несколько этапов формируется механизм воспроизведения структурных элементов и генетического материала вируса. Далее внутри клетки происходит сборка новых вирионов и их выход за пределы клетки, после чего цикл повторяется. Кроме гепатоцитов ВГС способен поражать иммунные клетки (T- и B-лимфоциты) и клетки центральной нервной системы, оставаясь неуязвимым для системы иммунной защиты организма.

Инкубационный период может длиться от 21 до 140 дней, но чаще занимает 50–60 дней. На ранних стадиях инфекция часто протекает бессимптомно. Далее у некоторых пациентов развивается острый вирусный гепатит (ОГС), который не приводит к разрушительному прогрессированию заболевания. Для ОСГ характерны симптомы острого нарушения функции печени: высокая температура, потеря аппетита, моча темного цвета, кал светлого цвета, желтушность кожи и белков глаз, боли в суставах. Примерно у 20–30% инфицированных вирус исчезает самопроизвольно не позднее полугода после заражения.

У 70–80% инфицированных заболевание переходит в хроническую форму (ХГС) с высоким риском развития цирроза печени или рака – гепатоцеллюлярной карциномы печени. Ввиду отсутствия симптомов не диагностированная инфекция может развиваться десятилетиями вплоть до появления вторичных признаков дисфункции, связанных с перерождением ткани печени. По оценкам экспертов, на сегодняшний день более 3,5 млн россиян имеют хроническую форму ВГС-инфекции.

Диагностика хронического гепатита С осуществляется в три этапа:

1. Скрининговое выявление антител к ВГС в крови.

2. Качественное и количественное определение РНК вируса в крови.

3. Определение генотипа (из семи возможных) и субтипа вируса – необходимое для выбора терапии исследование.

Постановка диагноза ХГС возможна, если в крови пациента РНК вируса определяется на протяжение 6 и более месяцев.

Вирус гепатита С, РНК HCV

Вирус гепатита С, РНК HCV

— качественное определение РНК вируса гепатита С в крови, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени».
Метод ПЦР
— позволяет идентифицировать в биологическом материале искомый участок генетического материала и обнаружить единичные молекулы РНК вируса, не выявляемые другими методами. Принцип метода основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка РНК.

С помощью ПЦР-анализа можно диагностировать инфекцию в остром периоде и выявлять случаи носительства.

Вирус гепатита С

Вирус гепатита С (ВГС, HCV) поражает клетки печени, а также некоторые клетки крови (нейтрофилы, моноциты, В-лимфоциты).

Основной путь передачи вируса гепатита С — кровь (препараты для переливания элементов крови и плазмы, донорские органы, нестерильные шприцы, иглы, инструменты), реже — заражение половым путём. Одним из основных факторов риска инфицирования является употребление инъекционных наркотиков.

Клинические проявления гепатита С
Основные клинические проявления гепатита С очень неспецифичны:

• слабость;
• утомляемость;
• тошнота;
• отсутствие аппетита;
• потеря веса;
• при циррозе печени может появиться желтуха.

Как правило, гепатит С протекает бессимптомно и в большинстве случаев диагностируется случайно. Гепатит C может вызвать как острую, так и хроническую инфекцию гепатита, которая влечет серьезное пожизненное заболевание.
Попадая в организм, вирус гепатита С (HCV) проникает в макрофаги крови и гепатоциты печени, где происходит его возобновление. Печень повреждается главным образом за счёт иммунного лизиса, также вирус оказывает прямое цитопатическое действие.

Гепатит С и аутоиммунные осложнения

Сходство антигена вируса с антигенами системы гистосовместимости человека обусловливает возникновение аутоиммунных («системных») реакций. В программе системных проявлений HCV-инфекции могут возникать аутоиммунный тиреоидит, синдром Шегрена, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, гломерулонефрит, ревматоидный артрит и др. В отличие от других вирусных гепатитов, гепатит С имеет менее яркую клиническую картину и в большинстве случаев переходит в хронические формы. Чаще всего хронический гепатит С приводит к развитию цирроза печени и очень редко — к развитию гепато-целлюлярной карциномы. С большой частотой возникают аутоиммунные осложнения.

Длительность инкубационного периода от 6 до 8 недель. В конце инкубационного периода повышаются уровни печеночных трансаминаз, возможно увеличение печени и селезёнки. Острый период протекает со слабостью, снижением аппетита. В 30% случаев возникает лихорадка, артралгия, полиморфная сыпь. Возможны диспептические явления и полинейропатии. Очень редко возникает холестаз. Лабораторные показатели отражают цитолиз. При высоком уровне трансаминаз (более 5 норм) и признаках печеночно-клеточной недостаточности следует заподозрить микст-инфекцию: HCV+HBV.

Острый вирусный гепатит

Острый вирусный гепатит, как правило, протекает бессимптомно и в большинстве случаев остаётся не выявленным. Наиболее тяжелые исходы хронического гепатита С — цирроз печени и гепатоцеллюлярная карцинома.

Показания:

• клинические признаки гепатита;
• профилактические скрининговые исследования (РНК вируса гепатита С — самый ранний маркёр при острой инфекции);
• обследования контактных лиц;
• диагностика гепатитов смешанной этиологии — выявление ведущего вируса;
• выявление стадии активной репликации вируса при хроническом состоянии;
• контроль эффективности проводимой терапии;
• цирроз печени.

Подготовка
Кровь необходимо сдавать утром с 08.00–12.00, спустя 2–4 часа после последнего приёма пищи. Накануне сдачи исследования нужно исключить физические и психоэмоциональные нагрузки.

Интерпретация результатов

Тест качественный. Результат выдаётся в терминах «обнаружено» или «не обнаружено».

«Обнаружено»: в анализируемом образце биологического материала найден фрагмент РНК, специфичный для вируса гепатита С, инфицирование вирусом гепатита С;

«Не обнаружено»: в анализируемом образце биологического материала не обнаружен фрагмент РНК, специфичный для вируса гепатита С, или концентрация РНК возбудителя в образце ниже границы чувствительности теста.

Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.

Чем опасен гепатит C?

Вирус гепатита C – это вирус, который содержит РНК и относится к семейству флавивирусов

. Заразиться им можно во время незащищенного секса, использования «грязных» шприцев, стоматологического, хирургического оборудования, при переливании зараженной крови, трансплантации органов, в тату-салонах и во время пирсинга, если оборудование плохо обрабатывают.

В России доля населения, зараженного вирусным гепатитом C, по оценкам экспертов, составляет от 3 до 4%. В нашей стране живет примерно 3,5 миллиона человек с хронической формой заболевания. Всего же в мире, по данным ВОЗ, хроническим гепатитом C заражено около 71 миллиона человек.

Попадая в организм человека, вирус гепатита C поражает клетки печени и некоторые клетки крови (B-лимфоциты, моноциты, нейтрофилы). В результате развивается воспаление ткани печени – гепатит. Он может протекать в острой и хронической форме.

Вирусный гепатит C способен протекать по-разному. Примерно у трети зараженных инфекция проходит сама без какого-либо лечения в течение полугода. У остальных заболевание переходит в хроническую форму, и это наиболее опасно. В течение 20 лет у 15–30% этих пациентов развивается цирроз – состояние, при котором нормальные клетки печени погибают и замещаются соединительной тканью. Со временем на фоне цирроза может возникнуть злокачественная опухоль. Вирусный гепатит C является основной причиной первичного рака печени.

По данным ВОЗ, ежегодно гепатит C уносит около 400 тысяч жизней во всем мире. Большинство пациентов погибают от цирроза и рака печени. Вирусный гепатит C часто называют «ласковым убийцей», и этот эпитет в полной мере отражает коварство заболевания. Даже в острой стадии инфекция может протекать практически без симптомов. Например, больной человек может чувствовать только повышенную утомляемость. Он считает, что просто сильно устает, не подозревает о том, что болен, и не обращается к врачам. Нередко хронические формы заболевания диагностируют случайно, во время профилактических обследований.

В Национальный календарь профилактических прививок России входит вакцинация против вирусного гепатита B. К сожалению, прививку против гепатита C пока разработать не удалось. Однако, существует эффективное лечение. Современные противовирусные препараты способны излечить 95% людей с гепатитом C.

Хуже всего поддается лечению гепатит, вызванный первым генотипом вируса, и при этой форме заболевания важно всегда проводить биопсию печени. Инфекции, вызванные возбудителями 1 и 4 типов, требуют более высоких доз препаратов и более длительной терапии. Если лечение подобрано неправильно, оно может привести к тому, что осложнения со стороны печени будут нарастать быстрее. Определение генотипа возбудителя помогает правильно подобрать препараты, их дозы и определить продолжительность лечения. Также при назначении терапии врач должен учитывать:

• пол, возраст и общее состояние пациента;
• симптомы;
• лечение, которое уже проводилось ранее;
• состояние печени;
• биохимические показатели, отражающие функцию печени.

Виды анализа ПЦР и его результаты

При наличии самых незначительных недомоганий и болей в области печения, стоит сразу обратиться к врачу, который проведет тщательное исследование. Анализ ПЦР на гепатит С, строится на трех основных моментах:

1. Количественный анализ.
2. Качественный анализ.
3. Генотипирование.

Проведенные тесты предоставляют возможность определить и выявить точный характер виремии и разные генетического плана симптомы наличия возбудителя. В прямой зависимости от чувствительности, от диагностической проводимой системы, медицинское исследование можно провести один раз, а также провести определенное подтверждение.

Это нужно провести с целью уточнения ранее полученных результатов, и используется в данном случае более чувствительным реагентом.

Качественный ПЦР

Качественный анализ на ПЦР — это иное название такого исследования, как полимеразная цепная реакция. При стандартной чувствительности теста, который позволяет определить присутствие вирусного микроба, показатели будут находиться в пределах 10-500 МЕ/мл.

При негативном анализе на данное заболевание анализ покажет, что общий уровень концентрации в крови больного будет находиться на порядок ниже общего порога восприимчивости к диагностической системе.

Если при проведении качественного ПЦР был получен ответ «не обнаружено», для проведения последующего лечения потребуется узнать общий порог чувствительности реагента. Что касается положительного ответа, то при проведении анализа ПЦР, его можно получить уже на 4-ые сутки после проведенного заражения. Стандартные белковые фракции к установленным флававирусам могут проявиться намного позже.

Общую схему анализов ПЦР можно изобразить следующим образом:

Количественный ПЦР

Количественный ПЦР — это особый показатель производимой вирусной нагрузки, отображающий общий уровень концентрации РНК вируса в теле человека. Данный показатель отображает количество ферментов вирусной РНК, который присутствует на одном кубическом сантиметре взятой из вены крови.

Результаты данного исследования в системе медицинского исследования обозначаются в единицах на один миллилитр. На выданных на руках справках данный показатель может иметь вид 1,7 млн или 1.700.000 МЕ/мл.

Количественный анализ ПЦР назначается тем пациентам перед тем, как провести направленную на борьбу с вирусом терапию. Второй раз проводится на 12-ой неделе лечения, что позволяет грамотно оценить результаты проведенной терапии с гепатитом С. Говоря иными словами, анализ дает возможность определить такие важные параметры, как:

1. Уровень инфекционности, то есть определяется степень риска процесса передачи микробов от одного зараженного человека к здоровому. Чем более высокой является концентрация РНК флававируса, тем выше будет вероятность заражения иного человека, что актуально при сексуальных отношениях.
2. Общий уровень эффективности и выбранного метода лечения.
3. Это идеальная возможность определить длительность и прогноз проведенной противовирусной терапии. Как правило, чем выше нагрузка, тем больше будет длиться терапия.

Стоит знать, что количественный ПЦР зависит от определенного типа лабораторного теста и порога чувствительности. Самой нижней границей установленного норматива считается показатель, не достигающий 600.000 МЕ/мл.

Средний показатель находится в диапазоне от 600.000 до 700.000 МЕ/мл. Если были получены результаты выше 800.000 МЕ/мл, врач сразу определяет высокий уровень концентрации такого вещества, как РНК с присутствующим в составе вирусом.

Важно! Прямая связь между уровнем HCV RNA и тяжестью заболевания говорит о том, что в общем составе крови присутствует данный вирус, а также отмечает сложность протекания патологии. У пациента может присутствовать достаточно высокая вирусная нагрузка. Кроме того, данная связь свидетельствует о том, что присутствует достаточно серьезное поражение клеток.

Генотипирование

По причине достаточно высокой мутационной активности HCV в природе, в процессе проведенного тестирования можно определить, как вид вируса присутствует в составе крови больного человека. В современной медицине известно 11 генотипов вируса такого заболевания, как гепатит С. В него входит достаточно большое количество разных подвидов или субтипов.

В России известны и распространены типы 1,2 и 3. Вообще, генотипирование — это очень важный элемент проводимого анализа. С его помощью врач понимает уровень резистентности или устойчивости патологии к выбранным лекарственным препаратам.

Практически всегда на основании данного анализа строится будущего лечения. Это важно, так как существуют такие правила лечения, как:

Еще одним преимуществом данного анализа является возможность в качестве дополнения определить общее состояние печени. Например, при третьем генотипе HCV заболевание может сопровождаться стеатозом или накоплением жира в клетках печени.

Результат анализа может определить тип гена, но также ответ может выглядеть, как «не типируется», это может говорить о том, что в составе крови присутствует вирус, который определяется именно этой тестовой системой. Это может являться свидетельством того, что генотип совершенно нехарактерен для той или иной географической зоны.

В этом случае стоит сдать анализ еще раз, используя более чувствительные системы диагностирования.

Что представляет ПЦР на гепатит

ПЦР – это метод полимеразной цепной реакции, который проводят для обнаружения возбудителя. Диагностические тесты на гепатит С можно разделить на следующие общие категории: серологические анализы, которые обнаруживают антитела к вирусу гепатита С; молекулярные анализы, которые обнаруживают и количественно определяют или характеризуют геномы вируса у инфицированного пациента.

Серологические анализы были разделены на скрининговые тесты на анти-ВГС (иммуноферментный анализ) и дополнительные тесты, такие как анализ рекомбинантного иммуноблотинга. Были разработаны три поколения тестов ПЦР, и каждое из них привело к улучшению чувствительности обнаружения анти-ВГС.

Чаще всего проводится анализ крови. Это помогает обнаружить наличие антител в крови. Если есть хотя бы малейшее количество антител – пациент является носителем вируса гепатита, так как у здоровых неинфицированных людей этот показатель равен нулю.

Как подготовиться к сдаче

На точность ПЦР-исследования влияют качество подготовки пациента, соблюдение медработником правил забора и хранения материала, неукоснительное выполнение лаборантом методики тестирования.

Требования по подготовке к кач. анализу на вирус гепатита С:

1. от приема пищи отказываются за полсуток до посещения лаборатории;
2. забор крови у женщин целесообразно проводить накануне или сразу после менструаций;
3. не рекомендуется волноваться и курить за полчаса до исследования;
4. кровь сдают натощак исключительно в утренние часы;
5. до исследования сообщают врачу о приеме рецептурных и безрецептурных лекарств, об имеющихся заболеваниях.

Для анализа берут венозную кровь из локтевой вены пациента. В его присутствии медработник маркирует пробирку с биоматериалом и отправляет ее в лабораторию.

Как выполняется тест

Для определения уровня HCV RNA методом ПЦР нужна венозная кровь. Чтобы результаты были достоверными, необходимо:

1. Избегать физического и нервного напряжения в течение 3 дней до сдачи анализа. Нарушение этого правила ведет к ослаблению организма с последующим повышением активности ВГС.
2. Не принимать алкоголь и медикаменты за 3 дня до теста. Эти вещества искажают результаты анализа. Если отмена лекарств невозможна – обязательно предупредить о них врача перед анализом.
3. Забор биоматериала проводится натощак, последний раз можно есть за 8 часов до визита в лабораторию.

Результаты анализа готовы через 2-5 дней после сдачи.