Количественный анализ на вирус гепатита С: расшифровка результатов

Диагностировать заболевания печени по внешним признакам или болевым ощущением достаточно трудно.

Это связано с особенностью органа, который практически не имеет нервных окончаний и является терпеливым х различным недугом.

Так дела обстоят и с гепатитами — на начальных стадиях они себя никак не выделяют, лишь при развитии заболевания может проявляться желтуха, повышаться температура и чувствоваться легкая боль в районе печени.

Чтобы с точность поставить диагноз и выбрать метод лечения врач может назначить целый ряд анализов: от анализа крови на антитела до УЗИ печени.

Но, сам гепатит диагностируется по крови, все дополнительные исследования предназначены в основном для понимания насколько вирус повредил печень.

На сеансе доктор может назначить вам количественный анализ на гепатит С. В данной статье мы разберем для чего он назначается, как проходит, возможные результаты и их расшифровку. В конце материала вы найдёте ориентировочную цену на сдачу крови на анализ.

Что это такое?

Такое исследование проводят чтобы понять, как много молекул вируса находится в организме

Количественный анализ — это исследование крови на присутствие гепатита. Он показывает как клеток в организме инфицировано вирусом, развивается ли заболевание или нет.

То есть он показывает концентрацию или нагрузку РНК гепатита С в организме человека в единицах на миллилитр или 1 кубический сантиметр крови.

В отличие от него, качественный анализ помогает определить только присутствие РНК вируса.

В каких случаях делают?

Исследование делается параллельно с качественным анализом после того, как проверка крови на наличие антител к гепатиту (ИФА) показала положительный результат. Делают его несколько раз:

• при первичной диагностике гепатита С до принятия решения о выборе курса лечения;
• во время лечения заболевания (обычно на 1, 4, 12 и 24 неделе) для определения клинической картины результатов терапии;
• после лечения для определения рецидива.

Важность

Количественный анализ является одним из основных видов исследования, на которые врач полагается при выборе методов лечения гепатита. Он служит для того чтобы:

1. Понять как сильно организм заражен вирусом, количественное присутствие антигенов в теле.
2. Эффективности выбранной терапии.
3. Подобрать метод лечения и составить его прогноз.

При этом данный анализ не позволяет судить о степени поражения печени или тяжести течения заболевания для организма. Для этого используют другие исследование, к примеру биохимический анализ крови, эластометрия, биопсия и другие.

Способ и сроки выполнения

Забор крови из вены обычно происходит с утра. Благодаря использованию полимеразной цепной реакции (ПЦР) такое исследование можно назвать одним из самых точных в области определения вируса.

Без использования научной терминологии можно описать процесс так: взятый биоматериал смешивают с определёнными ферментами, которые позволяют скопировать ферменты РНК ил ДНК вируса. Так делают до тех пор, пока не становится достаточно этих молекул для выявления возбудителя.

Срок выдачи результатов отличается в зависимости от медицинского учреждения и его загруженности. Итоги можно подвести спустя 4-5 часов после начало исследования. Поэтому результат могут выдавать уже на следующий день после забора крови.

Чем современней лаборатория, оборудование и реагенты, тем точнее и быстрее можно получить результаты

Лабораторные исследования методом ПЦР

Полимеразная цепная реакция до недавнего времени была лишь экспериментальным методом анализа и не была широко распространена в клинической практике. Принцип методики основан на так называемой амплификации – способности определенного участка генома патогена к многократному копированию.

Это достигается при помощи обязательных компонентов выполнения ПЦР:

• праймера, структура которого практически идентична определенным участкам РНК HCV,
• фермента, обеспечивающего реакцию амплификации.

Сам процесс лабораторного исследования происходит в буферном растворе, в котором содержится фиксированная комбинация катионов и анионов. Таким образом возможно поддержание оптимального для течения ПЦР уровня рН. Набор для проведения ПЦР содержит и протеины, используемые в качестве своего рода «строительного материала» при амплификации.

Структура праймера такова, что он может взаимодействовать только со строго определенным возбудителем. На этом принципе основана специфичность анализа методом ПЦР. Если иммуноферментные серологические исследования зависят от индивидуальных параметров иммунной системы человека, ПЦР направлена исключительно на выявление РНК возбудителя HCV.

Еще одна особенность проведения подобного исследования состоит в том, что расшифровка ПЦР гепатита С возможна как с использованием компьютерных программ (обычно используется, когда необходимо количественно установить содержание вируса в крови) и микроскопических методов. В норме у здорового в плане вирусного поражения печени человека патоген в крови отсутствует. Выявление возбудителя HCV методом ПЦР, будь то качественное либо количественное исследование, однозначно указывает на инфицирование.

Виды тестов

При помощи постановки ПЦР можно не только определить виремию, то есть фактический уровень патогена в кровотоке, но и генотип вируса. Все доступные исследования, выполняемые по такой методике, приведены в таблице.

При гепатите С проводится все три исследования ПЦР. Алгоритм диагностики состоит в следующем:

1. Общие клинические исследования («стандартный набор» – кровь, моча, биохимия и печеночные пробы), дополнительно могут назначать ревматоидные тесты и ряд других анализов при подозрении на аутоиммунные процессы;
2. Серологическое исследование (ИФА) на выявление антител к возбудителю гепатита С. Изначально показан тест Anti-HCV Total.
3. Качественная ПЦР, предназначена для подтверждения результатов ИФА.
4. Количественная ПЦР, выполняется при подтвержденном диагнозе HCV-инфекции.
5. Генотипирование, также проводится при установленном факте заражения.

Если человек желает самостоятельно обследоваться на гепатит С, рекомендуют сдавать ИФА. Дальнейшие обследования проводят в зависимости от полученных результатов. Если ИФА отрицательный и человек не предъявляет никаких жалоб, повторное тестирование проходят через год. Но при наличии симптомов патологии (в том числе и неспецифических, например, сильная слабость, утомляемость, боли в правом подреберье) следует сдать качественную ПЦР.

Подготовка к сдаче крови

Сдача биоматериала на проведение анализа происходит из вены. Особых рекомендаций по подготовке нет, поэтому актуальны стандартные правила, которые нужно соблюдать перед сдачей крови на исследование:

1. Делать это лучше утром натощак (последний прием пищи должен быть не ранее 8-12 часов до сдачи).
2. Если забор крови происходит не утром, то на завтрак нельзя употреблять жирную пищу (интервал в 8-12 часов также должен соблюдаться).
3. Отказаться от алкоголя, жирной и жаренной еды за 1-2 дня до исследования.
4. Не приходить на анализ на следующий день после праздничного застолья.
5. Курение запрещено как минимум за час до сдачи биоматериала.
6. Перед забором крови стоит посидеть 10-15 минут в спокойствии, чтобы расслабить тело, исключить влияние на результаты напряжения, как физического, так и психологического.
7. Если принимаете какие-либо лекарственные средства или им подобные препараты, то анализ можно сдавать спустя 10-14 дней после последнего их приема. (об этом факте необходимо сообщить врачу, возможно он установит иное условие).
8. Биоматериал не сдается сразу после выполнения ректального исследования, рентгенографии, физиотерапевтических процедур.
9. Первоначальный и повторный анализы лучше сдавать в одной и той же лаборатории (медицинском учреждении), так они разные заведения могут использовать различные реагенты, оборудование, единицы измерения и точность.

Расшифровка количественного анализа крови на гепатит С

Ранее отечественные специалисты делили виремию на несколько групп: очень низкую, низкую, умеренную, высокую и очень высокую. Но в настоящее время расшифровка анализа крови на гепатит С проводится в соответствии с международными нормами. Сейчас виремию делят только на 2 группы. В таблице указаны вероятные данные количественного анализа на гепатит С (окончательная расшифровка вне зависимости от показателей должна проводиться врачом).

Но только специалист может грамотно расшифровать количественное исследование на HCV и отличить показатели нормы от критических, свидетельствующих об отсутствии результата от противовирусной терапии либо о рецидиве инфекции. Все анализы должны быть подшиты в амбулаторную карту, чтобы у доктора была полная информация об активности вирусной инфекции и ответной реакции на прием таргетных медикаментов.

Показатели нормы

Показатели нормы при расшифровке количественного анализа на гепатит С бывают только тогда, когда результат ПЦР отрицателен, то есть РНК вируса во взятом образце крови отсутствует. В остальных случаях наличие патогена свидетельствует о заражении.

При подтверждении диагноза количественные показатели крови при гепатите С служат основой для оценки степени активности вирусного процесса. Высокая виремия повышает вероятность осложнений и сокращает срок наступления необратимых изменений в печени.

Вирусологическая нагрузка, превышающая 800 000 МЕ/мл служит основанием для проведения ряда инструментальных обследований:

• эластографии – диагностического метода для определения степени фиброза (разрастания и размеров очагов соединительной ткани);
• томографии – подробное рентгенологическое исследование, позволяющее исключить либо подтвердить наличие злокачественных или доброкачественных новообразований;
• биопсии печени, которая дает максимально полную информацию о структурных изменения в органе.

Низкая вирусная нагрузка говорит о медленно развивающейся вирусной инфекции. Такой процесс не исключает прогрессирования поражения печени, но вероятность возникновения тяжелого декомпенсированного цирроза или гепатоцеллюлярной карциномы низка. У такой категории пациентов редко возникают внепеченочные проявления гепатита С (кардиоваскулярные расстройства, аутоиммунные нарушения), что также повышает шансы не только успешной противовирусной терапии, но и быстрого общего восстановления.

Какие показатели крови указывают на инфицирование

При постановке диагноза назначают несколько исследований, таким образом ошибка в проведении тестирования исключается.

Основными маркерами при гепатите С служат:

1. Положительный результат иммуноферментного анализа. Но ИФА во многом зависит от состояния иммунной системы человека, поэтому на этапе первичной диагностики не исключают ложноположительный либо ложноотрицательный результат.
2. Коэффициент позитивности при гепатите С выше 1. Рассчитывается по титру антител. Иногда референсные значения могут отличаться в зависимости от используемой тест-системы, но физиологическая норма всегда указывается в бланке с результатами.
3. Положительный результат качественного теста ПЦР. Обнаружение РНК возбудителя патологии однозначно указывает на инфицирование.
4. Определяемая виремия методом количественной ПЦР.

Косвенными лабораторными признаками гепатита С служат:

• повышение уровня печеночных ферментов, билирубина;
• изменение уровня лимфоцитов, в некоторых случаях, лейкоцитов, ускорение СОЭ.

Но при ответе на вопрос, какие показатели крови указывают на гепатит С, доктора руководствуются результатами ПЦР, так как ИФА может быть непоказательным при наличии определенных заболеваний (ВИЧ, аутоиммунных расстройств). Также неверные результаты вероятны при беременности, приеме некоторых лекарств. Не последнюю роль играет и анамнез.

При гепатите С антитела, как и РНК обнаруживаются при помощи тест-систем не сразу, а спустя как минимум 10–14 дней. ИФА может дать достоверный результат позже – через 4–6 недель после инфицирования. Поэтому если есть серьезные основания предполагать контакт с кровью больного, при негативном результате все анализы имеет смысл повторить через 1–1,5 месяца.

Возможны ли ошибочные результаты

В современных лабораториях тестирование проводят с соблюдением всех норм (в соответствии с требованиями отечественного и зарубежного законодательства), но исключить вероятность ошибок и ложных результатов нельзя.

Если на выполнение ИФА оказывает влияние состояние иммунной системы человека, правильность выполнения ПЦР зависит от:

• соблюдения стерильности при заборе, транспортировке и работе с образцами крови пациента, чтобы исключить возможный контакт с контаминированными образцами;
• соблюдения температурного режима и других правил при хранении и перевозке пробирок с кровью;
• правильности постановки ПЦР (начиная от работы лаборанта и заканчивая функционированием автоматических диагностических систем);
• качества используемых лабораторных материалов.

Но количественный анализ проводится на основании уже выполненных исследований, которые однозначно указывают на наличие HCV (ИФА и качественная ПЦР). Поэтому при отрицательном результате на фоне подтвержденного диагноза исследование повторяют. Кроме того, обращают внимание, как обозначается гепатит С в анализах.

В некоторых клиниках могут пользоваться устаревшей системой, когда виремия указывается не в международных единицах, а в количестве копий. Иногда путаница возникает с подсчетом нулей в указанных цифрах. Именно поэтому расшифровкой обозначений в бланке результатов должен заниматься врач.

Расшифровка результатов

В зависимости от уровня концентрации вируса в организме делают различные выводы касательно терапии заболевания

Далее, определяют эффективность лечения. Если при повторном анализа нагрузка вируса является меньшей, чем 8*105 МЕ/мл, то можно утверждать, что терапия идёт в правильном направлении и в борьбе с заболеванием есть успех.

Говорить о раннем вирусологическом ответе можно при условии снижения количественного присутствия РНК вируса на третий день лечения. Но вероятность этого находится на уровне 85%.

Если же, показатель более 8*105 МЕ/мл, то доктор должен пересмотреть схему лечения и выбрать более подходящую. Соответственно, чем больше уровень, тем сильнее вирус поразил организм и хуже прогноз.

При этом результаты в разных лабораториях могут указываться в МЕ/мл или в копиях на мл. Коэффициент перевода разные (колеблются примерно от 1 до 5) и зависит от метода, использованного для определения количественного показателя. В основном на практике принято, что 1 МЕ/мл = 4 копиям на мл.

Бывают ли ошибки?

К сожалению, диагностика может быть ошибочной. Но это только в том случае, если медицинское учреждение использует устаревшее оборудование, неподходящие реактивы, тогда некоторая доля неправильных результатов присутствует.

Также могут повлиять такие факторы:

• присутствие гепарина либо ингибиторов в крови;
• загрязнение биоматериала в процессе выполнения исследования.

При правильной подготовке к анализу в современных лечебных центрах такая вероятность близка к нулю.

Характеристика количественного анализа

В целом, техника выполнения ПЦР по большому счету одинакова, как для качественного, так и количественного исследования. Образец биологического материала смешивают с тест-раствором, который содержит специальные соединения. Их роль состоит в стимуляции деления РНК патогена (причем строго специфичного генетического материала возбудителя).

В результате концентрация HCV достигает лабораторно определяемого уровня. На данном этапе возможно проведение качественного анализа. Однако после сложных подсчетов (обычно для этих целей используют компьютерные программы) устанавливают количественный показатель содержания HCV. После этого полученный результат переводят в Международные Единицы и фиксируют в лабораторном бланке.

В некоторых случаях вместо ПЦР используют другие методики – разветвленной ДНК и транскрипционной амплификации. Но из-за сложности выполнения и более низкой чувствительности большинство специалистов предпочитают выявлять количественные нормы гепатита С именно при помощи ПЦР.

Показания

Сейчас практически в любой частной лаборатории пациент может пройти обследования без каких-либо бумаг и направлений от терапевта. Количественное определение вируса гепатита С в крови не является исключением. Вопрос в том, когда целесообразна сдача теста?

Гепатологи рекомендуют проведение исследования в таких случаях:

• позитивный ИФА + положительная ПЦР;
• негативный ИФА + положительная ПЦР.

Кроме того, количественное определение HCV показано и в ходе противовирусной терапии. Врач сравнивает результаты виремии, полученные до начала курса приема медикаментов, с результатами тестирования, проведенного уже во время лечения. Нормой считается негативная ПЦР к 12 неделе применения препаратов. А предиктором 100% выздоровления считают отсутствие виремии уже через месяц терапии.

Тестирование продолжают и после окончания лечения для исключения риска рецидива. Пациент должен сдавать такой тест на протяжении еще 2 лет. При отрицательном результате говорят о выздоровлении. Больного снимают с учета у гепатолога или инфекциониста и дают общие рекомендации относительно восстановления состояния печени.

Если спустя 2 года количественный тест на HCV вновь положителен, все исследования повторяют заново. В таком случае предполагают повторное инфицирование и, возможно, другой генотип вируса. Но требуется новая схема лечения, а вероятность благополучного исхода существенно ниже.

Когда информативно проведение теста

Сроки выполнения количественного определения вирусной нагрузки при подтвержденной HCV-инфекции указаны в таблице.

К кому обращаться и какая стоимость

Если у вас есть подозрения на гепатит, стоит обратиться к вирусологу, инфекционисту или гепатологу. В случае надобности они отправят вас к другим врачам.

Цена на такие исследования может быть разной. Кроме того, что она зависит от наценок самих диагностических центров, так и от сложности работы, оборудования и т. д.

В современный лабораториях ориентироваться можно на 2900-3000 рублей (1350-1400 грн) без стоимости взятия крови из вены. Есть и клиники, которые предлагают выполнить анализ от 300 рублей (около 140 грн).

Примерная форма результатов анализа выглядит таким образом

Какими методами определяется вирусная нагрузка

1. Полимеразной цепной реакцией (ПЦР).
   Является самым популярным методом исследования, позволяющим обнаружить даже малые количества РНК вируса. Минус у этого анализа только один — он слишком дорог. Суть теста: на исследуемый биоматериал оказывают тепловое воздействие, чтобы вирусная РНК активно размножалась и увеличивалась масса исследуемого субстрата. Далее добавляют особый краситель, вступающий в реакцию с РНК. Затем с помощью специальной шкалы оценивают степень окрашивания и делают вывод о вирусной нагрузке. В соответствии с целью исследования, ПЦР может быть качественной, количественной и генотипированием. Чувствительность метода составляет 50 МЕ в 1 мл и выше;
2. Разветвленной ДНК.
   У метода есть несколько недостатков — он малочувствителен (от 500 МЕ в 1 мл), не предоставляет возможности генотипирования, часто дает ложноотрицательные результаты. Но есть у него и плюсы — небольшая стоимость и возможность тестирования сразу нескольких образцов. Метод разветвленной ДНК используют, чтобы оценить качество терапии у пациентов с уже установленным диагнозом. В его основе — использование двух нуклеотидных зондов. Один конец первого зонда связывают с молекулой РНК вируса, а другой — с молекулой-усилителем. Далее вносят второй зонд: он помечен красящим веществом и по своей структуре похож на молекулу-усилителя. Сформировавшийся сигнал фиксируют хемилюминесценцией;
3. Транскрипционной амплификацией (ТМА).
   Метод имеет высокую чувствительность (5-10 МЕ/мл). Тестирование проводят при достаточно низкой температуре. Сначала РНК вируса подвергают процедуре амплификации, затем результат фиксируют люминометром.