Эритроциты

Методика подсчета эритроцитов в камере Горяева

Устройство камеры и сетки Горяева. Камера Горяева представляет собой толстое предметное стекло, прорезанное четырьмя поперечными бороздами. Борозды делят стекло на пластинки — две боковые и среднюю. Средняя пластинка на 0,1 мм ниже боковых. Она разделена поперечной бороздкой на 2 равные части. На каждой половине средней пластинки нанесена сетка Горяева. Принадлежностью’ камеры служит шлифованное покровное стекло. Его следует наложить так, чтобы оно покрыло обе боковые и среднюю пластинки. Нажимая большими пальцами на края стекла, его притирают к боковым пластинкам до появления радужных колец (кольца Ньютона).

Так как боковые пластинки выше средней, между нею и покровным стеклом остается щель. Это и есть камера, в которую заливают разведенную кровь. Глубина камеры 0,1 мм.

Нанесенная на дно камеры сетка Горяева квадратная. Сторона ее — 3 мм, площадь-—9 мм». Сетка разграфлена на 225 больших квадратов—15 по горизонтали и 15 по вертикали. Часть больших квадратов (через два на третий) разделена на 16 малых квадратов. Сторона малого квадра­та равна 1/20 мм .

Техника подсчета. Правильное заполнение счетной камеры разведенной кровью обеспечивает точность под­счета форменных элементов. Перед заполнением камеры содержимое пробирки перемешивают, вращая ее между ладонями в течение 2 мин. Разведенную кровь наносят на среднюю пластинку камеры пастеровской пипеткой с баллоном или стеклянной палочкой, помещая ее около края покровного стекла. По закону капиллярности жид­кость затекает под стекло, заполняя камеру.

После заполнения камеру нужно положить на стол на 2—3 мин, пока движение жидкости в ней не прекратится, и клетки не расположатся неподвижно на фоне квадратов сетки. При заполнении камеры жидкость не должна стекать в борозды. Недопустимо попадание в камеру пузырьков воздуха.

Подсчет производят под малым» увеличением микро­скопа (об.8, ок.10 или 15), конденсор должен быть опущен, а диафрагма закрыта.

Возможные ошибки при подсчете:

Правила:

-к данному квадрату принадле­жат клетки, находящиеся большей своей половиной внут­ри него;

— клетки, разделенные пограничной линией попо­лам, считают только на верхней и левой границе квадрата;

— клетки же, лежащие большей своей половиной вне данно­го квадрата не считают вовсе.

Принцип. Подсчет эритроци­тов под микроскопом в определенном количе­стве квадратов счетной сетки и пересчет на 1 мкл крови, исходя из объема квадратов и разведе­ния крови.

Реактивы. 0,9 % раствор хлорида натрия

Специальное оборудование. 1. Счетная камера Горяева. 2. Микроскоп.

Ход исследования. Разводят иссле­дуемую кровь в 200 раз. Для этого в сухую про­бирку отмеривают 4 мл реактива 1 или 2. Пипет­кой набирают 0,02 мл крови. Кончик пипетки вы­тирают фильтровальной бумагой или марлей, и кровь выдувают на дно пробирки; пипетку тща­тельно промывают в верхнем слое жидкости, повторно набирая ее и выдувая в пробирку, содержимое пробирки перемешивают и остав­ляют стоять до момента счета (рекомендуется считать эритроциты в ближайшие 2—3 ч после взятия крови, а при гемолитических и. В 12-дефи­цитных анемиях — сразу после взятия, так как эритроциты могут разрушиться). Недопустимо оставлять взятую кровь с несосчитанными эри­троцитами на следующий день, так как эритро­циты частично разрушаются.

Подготавливают счетную камеру: протирают насухо камеру с сеткой и покровное стекло, за­тем покровное стекло притирают к камере, слегка надавливая на стекло таким образом, чтобы по краям его появились радужные полосы (это сви­детельствует о требуемой высоте камеры — 0,1 мм).

Заполняют счетную камеру разведенной кровью: предварительно несколько раз тщатель­но встряхивают содержимое пробирки, затем пастеровской пипеткой или стеклянной палочкой отбирают каплю разведенной крови и подносят ее к краю покровного стекла, следя за тем, чтобы она равномерно без пузырьков воздуха запол­нила всю поверхность камеры с сеткой, не зате­кая в бороздки. Заполненную камеру оставляют в горизонтальном положении 1 мин (ДЛЯ ОСЕДАНИЯ эритроцитов).

Для подсчета эритроцитов — микроскоп (объектив на 8х, окуляр на 10Х), находят верхний левый край сетки. Счет производят в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых, т. е. в 80 малых квадратах.

Расчет количества эритроцитов:

производится по следующей формуле:

Х= а ■ 4000 ■ в

б

где X — количество форменных элементов в 1 мкл крови;

а — количество формен­ных элементов, сосчитанных в 80 малых квадратов;

б— количество сосчитанных малых квадратов;

в — степень разведения крови; 1\4000 мкл — объем малого квадрата; умножая на 4000, приводим к объему 1 мкл крови.

Сокращенная формула: Х= а х10000

Нормативные показатели:

У мужчин: 4,0-5,0 х 10 12

У женщин: 3,7-4,7 х 10 12

Клинико-диагностическое значение: Снижение числа эритроцитов в крови является одним из ос­новных лабораторных критериев анемии. Однако степень эритроцитопении широко варьирует при разных формах малокровия. Так, при наиболее распространенном заболевании — железодефицитной анемии на почве хронических кровопотерь — количество эритроцитов может быть нор­мальным или нерезко сниженным (3• 106 — 3,6-106 в 1 мкл, или 3-10’2/л — 3,6-10|2/л). При острой кровопотере, В|2

-дефицитной анемии (в стадии рецидива), гипопластической анемии, гемолитических анемиях (в период криза) число эритроцитов в крови может значительно сни­зиться и достигнуть I -106 в 1 мкл, или 1 • 10|2/л и менее.

Повышение количества эритроцитов в кро­ви — эритроцитоз — может быть обусловлен многими причинами. Значительный эритроцитоз (6,5-106—8,5-10е в 1 мкл, или 6,5-10|2/л — 8,5-10|2/л крови) является одним из важных лабораторных симптомов эритремии. Другие гемобластозы миелопролиферативной природы (сублейкемический миелоз или миелофиброз и хронический миелолейкоз) реже сопровождают­ся эритроцитозом и только в начальной стадии заболевания.

Вторичный(симптоматический) эритроцитоз может сопутствовать широкому кругу различ­ных заболеваний и бывает абсолютным (связан­ный с усилением нормального эритропоэза) и от­носительным (гемоконцентрационный). Абсо­лютные эритроцитозы сопутствуют хроническим обструктивным заболеваниям легких, врожден­ным порокам сердца, первичной легочной гипертензии, синдрому Пиквика, наследственным гемоглобинопатиям, гипернефроидному раку, гемангиобластоме мозжечка, гепатоме, гормо­нально-активным опухолям, заболеваниям, со­провождающимся стенозом почечных артерий, заболеваниям ЦНС и др. Вторичные относитель­ные эритроцитозы связаны с нарушением гемо-концентрации и характеризуются нормальным объемом циркулирующих эритроцитов при сни­жении массы циркулирующей крови и массы циркулирующей плазме.

Патологические формы эритроцитов

Повышение числа эритроцитов — полицитемия, мо­жет быть истинной (опухолево-пролиферативный процесс) и симптоматической (реактивное раздражение эритропоэза, сгущение крови, нарушение нервной регуляции и пе­рераспределения). Понижение числа эритроцитов — ане­мия (постгеморрагическая, гемолитическая, вследствие нарушения кроветворения).

Качественные изменения эритроцитов

. Анизоцитоз — изменение величины эритроцитов (эритроциты меньших размеров называются микроцитами; больших — макроцитами, эритроциты диаметром 12 мкм и более называются мегалоцитами). Пойкилоцитоз — изменение формы эритроцитов (грушевидные, серповидные — дрепаноциты, каплевидные, мишеневидные, с вытянутыми концами, шизоциты — обломки разрушенных эритроци­тов, акантоциты — эритроциты зубчатой формы, стоматоциты — эритроциты с просветлением в центре в виде узкой линейной полоски как форма рта, эхиноциты — эритроциты с множественными выростами, анулоциты — эритроциты в виде пустых колец). Анизохромия — из­менение интенсивности окраски эритроцитов в патологи­ческих случаях. Встречаются бледно окрашенные эрит­роциты — гипохромия, интенсивно окрашенные — гиперхромия. Эритроциты могут окрашиваться не только кислыми, но и основными красителями — полихромазия.

Обнаруживаются при патологии в периферической кро­ви ядросодержащие эритроциты: нормобласты, эритро­бласты и мегалобласты. Мегалоциты и мегалобласты ха­рактерны для анемии Аддисона-Бирмера.

В эритроцитах можно иногда обнаружить остатки ядерной оболочки — так называемые кольца Кебота и ядерные остат­ки — тельца Жолли при мегалобластных анемиях, отравле­нии гемолитическими ядами и др. При свинцовом отравлении и у людей, принимающих препа­раты крови, наблюдается базофильная пунктуация эритроци­тов (наличие точечной зернисто­сти). Сидероциты — эритроциты с включениями не гемоглобинового железа (ферритин, гемосидерин) в виде мелких гранул синего цвета.

2.5 Подсчет лейкоцитов

Подсчет эритроцитов камерным методом

При использовании камерного подсчета эритроцитов необходима ее предварительная подготовка. Ее дезинфицируют в спирте, тщательно протирают до появления радужных кругов. Сверху помещают покровное стекло, через которое возможен осмотр с помощью микроскопа. Оно позволяет жидкости распределиться по полости, устраняет пузырьки.

Для проведения исследования необходимо выполнить несколько этапов.

• Разведение биологической жидкости в 200 раз. Для этого берут 1 мл крови, добавляются 4 мл реагента. Содержимое пробирки тщательно перемешивают.
• Подсчет эритроцитов рекомендуется проводить сразу после взятия крови, так как при некоторых заболеваниях эритроциты быстро разрушаются.
• Берут небольшой образец жидкости с помощью стеклянной палочки, наносят на область углубления в камере. Ждут несколько минут, чтобы она распределилась по сетке. Должны уйти все пузырьки воздуха.
• Подсчет клеток осуществляется помощью малого увеличения микроскопа. Если необходимо рассмотреть внутреннюю структуру форменного элемента, изображение переводят на большое увеличение. Клетки считают в 80 малых квадратах. Микроскоп перемещается слева направо, вниз, справа налево. Это предотвращает подсчет одной и той же клетки несколько раз.
• Полученный результат подставляют в формулу, которая учитывает разведение. Итоговые цифры записывают на бланк исследования.

Раствор для подсчета эритроцитов

Для подсчета числа эритроцитов необходимо использовать реагенты, с помощью которых разводят полученную кровь:

• хлорид натрия 0,9%;
• сульфат натрия;
• сублимат.

В методике дополнительно применяют следующие жидкости:

• этиловый спирт – стерилизующий компонент, необходимый для дезинфекции камеры и покровного стекла;
• дистиллированная вода – применяют после дезинфекции поверхности для устранения следов этилового спирта.

Какой способ для подсчета эритроцитов лучше?

Все методики для подсчета эритроцитов имеют положительные и отрицательные стороны. Использование полуавтоматического анализатора точнее, так как он не ошибается в обнаружении количества клеток при правильном использовании. Если считать клетки вручную, повышается риск врачебной ошибки.

Важно! Но у автоматических анализаторов имеется недостаток — отсутствие визуального осмотра клеток, обнаружения изменения формы, размера, диаметра, целостности.

Ошибки при подсчете эритроцитов

Возможно неправильно рассчитать количество красных кровяных телец, если были допущены ошибки при сборе, обработке, подсчете.

• Неточное разведение вследствие увеличения или снижения количества крови или раствора для подсчета. Эритроциты будут находиться в минимальном и максимальном количестве перед объективом микроскопа. Врач может ошибочно поставить диагноз эритропения (снижение эритроцитов) или эритроцитоз (повышение эритроцитов).
• Позднее введение антикоагулянта в собранную кровь, что вызывает образование сгустка. Следствие этого — требуется повторный забор крови.
• Недостаточное перемешивание полученного раствора после разбавления. Реагент не распределяется в биологической жидкости, что полностью устраняет возможность подсчета клеток.
• Недостаточные дезинфицирующие мероприятия в отношении счетного устройства. Врач может забыть предварительно протереть стёкла этиловым спиртом. Использование ваты вызовет попадание ее волокон на предметное стекло. Инородные предметы затрудняет исследование. Если счетную камеру после использования не опустить в стерилизующий раствор, дальнейшее применение будет невозможно.
• Подсчет клеток сразу после залития биоматериала без ожидания паузы. Вследствие этого врачи не смогут посчитать эритроциты, так как биологическая жидкость будет двигаться и распределятся по сетке.
• Ошибка в подсчете количества квадратов. Для каждой методики подсчета эритроцитов требуется считать клетки в определенном числе больших и малых квадратов.
• Образование пузырьков воздуха. Через них невозможно рассмотреть биоматериал с помощью микроскопа.
• Использование некачественных реактивов. Возможна закупка дешевых материалов или их использование после завершения срока годности.
• Неправильная подготовка пациента к исследованию. Например, должна учитываться физическая активность. Подсчет эритроцитов до и после мышечной нагрузки дает разный результат.

Внимание! Часто врачи не замечают ошибки в проведенном исследовании. По этой причине рекомендовано проводить 2 анализа. Если оба из них показывают одинаковые результаты, исследование достоверно. Если обнаруживаются резкие изменения, анализ проводят в третий раз.

Подсчет количества эритроцитов в моче

Подсчёт числа красных кровяных телец в урине осуществляется с помощью использования метода по Нечипоренко в счётной камере. Для этого мочу помещают в пробирку, центрифугируют на больших оборотах. Выпадает осадок, который перемещают с помощью пипетки в счетную камеру.

Лаборант подсчитывает количество эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров. После этого используется микроскоп, который перемещают слева направо, вниз, справа налево. В норме не должно быть больше 1-2 эритроцитов на весь объем исследованной жидкости.

Узнай больше об анализе на эритроциты в моче при беременности!