Chlamydia trachomatis, ДНК, количественно [реал‑тайм ПЦР]

Подробное описание исследования

Хламидия трахоматис – внутриклеточный паразит, передающийся половым путем, вызывающий одно из распространенных заболеваний – хламидиоз. Инфекция поражает слизистые оболочки половых путей, часто протекает бессимптомно, переходит в хроническую форму, сопровождается различными осложнениями (бесплодие, невынашивание беременности, артриты). Хламидия очень устойчива к антибактериальной терапии, активация хронической инфекции происходит при изменении иммунного и гормонального статуса, травмы, операции, стресса.

Хламидии — большая группа облигатных внутриклеточных паразитов, близких по строению к грамотрицательным бактериям. Род Chlamidia делят на 4 вида: Chlamidia trachomatis, Chlamidia psittaci, Chlamidia pneumonia, Chlamidia percorum. К заболеваниям, вызываемым хламидией трахоматис, относятся: урогенитальный хламидиоз и конъюнктивит, венерическая лимфогранулема, реактивный артрит, редко — эндокардит. Острый урогенитальный хламидиоз характеризуется обильными слизисто-гнойными выделениями, покраснением и отёком слизистой оболочки, расстройствами мочеиспускания, болевым синдромом в области малого таза. Симптомы обычно появляются через 3-4 недели после заражения. Для хронического хламидиоза характерны менее выраженные, стертые симптомы, а иногда — их отсутствие. Грозными осложнениеми хронического хламидиоза являются бесплодие, невынашивание беременности, экстрагенитальная патология.

Основные формы урогенитального хламидиоза — эндометрит, сальпингит, оофорит, цистит, эпидидимит, орхит, простатит. Часто хламидиоз сопровождается инфицированием другими возбудителями мочеполовых инфекций, такими как микоплазмы, уреаплазмы, гонококки, трихомонады. Своевременное выявление инфекции позволяет повысить эффективность лечения и избежать хронизации процесса. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет увеличить число копий ДНК бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК. Синтезированное количество ДНК идентифицируют методами иммуноферментного анализа или электрофореза. ПЦР-диагностика позволяет обнаружить возбудителя на самых ранних этапах инфекционного процесса, в любой биологической среде организма, с возможностью количественного определения вирусов или бактерий.

Chlamydia trachomatis, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Исследование для выявления возбудителя урогенитального хламидиоза (Chlamydia trachomatis), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) хламидий в образце, полученном из урогенитального тракта.

Синонимы русские

Хламидия, возбудитель хламидиоза.

Синонимыанглийские

Ch. trachomatis, DNA (qPCR, Real-time PCR, RT-PCR), Chlamydia trachomatis by Amplified Detection.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок урогенитальный (с секретом предстательной железы), первую порцию утренней мочи, эякулят, ректальный мазок, мазок из десневого кармана, мазок с конъюнктивы.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Женщинам рекомендуется сдавать анализ до менструации или через 2 дня после её окончания.
• Мужчинам нельзя мочиться в течение 3 часов до взятия урогенитального мазка или мочи.

Общая информация об исследовании

Chlamydia trachomatis – бактерия, внутриклеточный паразит, возбудитель нескольких заболеваний человека. В частности, некоторые серовары этого вида вызывают трахому и венерическую лимфогранулёму. В России наиболее распространена хламидийная инфекция мочеполовой системы (урогенитальный хламидиоз). Она передаётся половым путем, а также от матери к ребёнку при родах. Возможен и контактно-бытовой путь передачи. Chlamydia trachomatis – самый частый возбудитель негонококкового уретрита. У женщин хламидиоз встречается чаще, чем у мужчин.

Инкубационный период составляет от 2 недель до 1 месяца. Часто (примерно в половине случаев) хламидиоз протекает бессимптомно.

Начальные симптомы инфекции: жжение и боль при мочеиспускании, слизистые выделения, помутнение мочи, слабость, немного повышенная температура, у мужчин – воспаление мочеиспускательного канала, которое длится долгое время, у женщин – слизистые или гнойные выделения из влагалища. В дальнейшем могут возникать различные осложнения: эпидидимит, эндометрит, конъюнктивит, артрит и др.

Считается, что хламидийная инфекция опасна при беременности, так как может привести к преждевременным родам, выкидышу, сниженному весу новорождённых и даже гибели плода.

Кроме того, новорождённый ребенок иногда заражается хламидиозом от матери при прохождении через родовой канал, из-за чего у него развивается конъюнктивит либо пневмония.

Для диагностики хламидиоза применяют серологические методы (например, ИФА), посев хламидий, а также выявление ДНК бактерий (например, ПЦР).

У серологических методов и посева есть ряд ограничений, так что тесты на основе ПЦР считаются самыми удобными и чувствительными.

ПЦР в реальном времени (РТ-ПЦР) – это лабораторный метод, который позволяет найти в пробе ДНК возбудителя: если в образце присутствует Chlamydia trachomatis, то реал-тайм ПЦР обнаружит ДНК этой бактерии. Принцип заключается в том, что ДНК возбудителя, которого хотят выявить, много раз копируется с помощью специальных ферментов (ДНК-полимераз). Обычно проходит несколько десятков циклов и в ходе каждого нужная ДНК удваивается. В результате количество исследуемой ДНК увеличивается в миллионы раз и её можно детектировать с помощью флуоресцентного красителя.

При ПЦР в реальном времени количество ДНК выявляется в процессе копирования, после каждого цикла. Но при этом с помощью РТ-ПЦР нельзя различить формы инфекции (например, свежеприобретённое или давнее заражение).

Наилучшим материалом для анализа считается утренняя моча (у мужчин) или мазок из влагалища.

Для чего используется исследование?

Для диагностики инфекции, вызванной Chlamydia trachomatis, и мониторинга ее лечения.

Когда назначается исследование?

• Для диагностики урогенитального хламидиоза при следующих симптамах: жжение и боль при мочеиспускании,
• покраснение в области наружного отверстия уретры у мужчин,
• слизистые выделения из половых путей,
• помутнение мочи,
• слабость,
• субфебрильная температура.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Отрицательный результат

• Хламидийная инфекция отсутствует.Воспаление вызвано другим возбудителем.

Положительный результат

• Хламидийная инфекция присутствует.Если есть воспаление, то оно, вероятно, вызвано хламидиями. В этом случае содержание ДНК в пробе высокое.
• Хламидии присутствуют, однако воспаление может быть вызвано другим возбудителем. В этом случае ДНК хламидий выявлена в небольшом количестве.

Также рекомендуется

• Chlamydia trachomatis, IgM, титр
• Chlamydia trachomatis, IgG, титр
• Chlamydia trachomatis, IgA, титр
• Посев на Chlamydia trachomatis
• Посев на Chlamydia trachomatis с определением чувствительности к антибиотикам

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, терапевт, инфекционист, гинеколог.

Литература

• Goldman’s Cecil Medicine. 24th ed. Goldman L, Schafer A.I., eds. Saunders Elsevier; 2011.
• Howie S. E. Chlamydia trachomatis infection during pregnancy: known unknowns. Discov Med. 2011; 12(62): 57 – 64.

Антитела к хламидии lgG, Chlamydia tr. IgG, колич.

Антитела к хламидии lgG, Chlamydia tr. IgG, количественный

— позволяет определить наличие антител класса IgG к Chlamydia trachomatis, что свидетельствует о текущем или недавнем инфицировании.
Chlamydia trachomatis
— это вид хламидий, которые являются возбудителем одного из самых распространенных заболеваний — хламидиоза.

Когда происходит контакт человека с Chlamydia trachomatis, его иммунная система реагирует, вырабатывая антитела IgG против паразита.

Хламидиоз

— бактериальное инфекционное заболевание системного характера, с преимущественно подострым или хроническим течением. Характеризуется поражением эпителия слизистых оболочек (половых органов, глаз, органов дыхательной системы).

Инфекция передаётся половым, контактно-бытовым путём. Группу риска составляют лица, практикующие беспорядочные половые связи и члены семей (особенно дети) инфицированных хламидиозом. Размеры элементарных телец С. trachomatis очень малы — 0,2–0,4 мкм. Это обусловливает неполную защиту половых партнёров механическими средствами контрацепции.

Chlamydia trachomatis существует в двух формах: инфекционной (элементарное тельце) — метаболически слабоактивной, приспособленной к существованию во внеклеточной среде, и вегетативной (ретикулярное тельце) — внутриклеточной форме, метаболически активной, образующейся при размножении хламидий. В результате деления ретикулярных телец внутри цитоплазматической вакуоли и их превращения в элементарные тельца формируется до 1000 новых элементарных телец. Цикл развития завершается, как правило, гибелью эпителиальной клетки и выходом из неё новых элементарных телец.

При определённых условиях (особенности иммунитета, неадекватная терапия антибиотиками), происходит задержка созревания ретикулярных телец и их превращения в элементарные тельца, что приводит к снижению экспрессии основных антигенов Chlamydia trachomatis, уменьшению иммунного ответа и изменению чувствительности к антибиотикам. Возникает персистирующая инфекция. Реактивация персистирующей инфекции может произойти под действием изменения иммунного или гормонального статуса, травмы, операции, стресса.

Интоксикация для хламидийной инфекции не характерна. Исходом воспалительного процесса при хламидиозе является утолщение пораженной слизистой оболочки, метаплазия эпителиоцитов в многослойный плоский эпителий с последующим разрастанием рубцовой соединительной ткани. Последнее, как полагают, является одной из основных причин вторичного бесплодия у мужчин и женщин в результате инфекционного процесса хламидийной этиологии.

Системный характер поражений (в том числе при синдроме Рейтера) имеет аутоиммунный характер и не связан с бактериемией. Клиническая картина инфекции, в большинстве случаев, не является специфичной. Манифестные формы хламидиоза у мужчин могут протекать в виде уретрита, проктита, конъюнктивита, фарингита. У женщин — уретрита, цервицита, проктита, конъюнктивита, венерической лимфогранулёмы. У детей — конъюнктивита, пневмонии, отита, бронхиолита.

Наибольшие диагностические трудности представляют бессимптомные формы. Значительные терапевтические проблемы связаны с осложнениями хламидиоза. Это могут быть: сальпингит, эндометрит, внематочная беременность, бесплодие; послеродовый эндометрит, преждевременные роды, невынашивание беременности, мёртворождение, опухоли урогенитального тракта — у женщин; эпидидимит, простатит, синдром Рейтера, бесплодие, ректальные стриктуры — у мужчин.

Антитела к Chlamydia trachomatis

Антитела класса IgG выявляются в крови через 15–20 дней после инфицирования Chlamydia trachomatis и в дальнейшем продолжают выявляться на протяжении всего заболевания, а также в течение продолжительного времени после выздоровления. IgG сохраняются в крови в течение нескольких лет, иногда даже пожизненно. Это специфические, высокоактивные антитела, однако стойкого иммунитета против хламидий они не обеспечивают. Титр IgG снижается при излечении и затихании процесса, при реактивации титр нарастает, иногда четырехкратно.
Показания:

• бесплодие;
• невынашивание беременности;
• уретрит;
• цервицит (в том числе, возникший во время беременности);
• сальпингит;
• эндометрит;
• проктит;
• простатит;
• эпидидимит;
• внематочная беременность;
• мёртворождение;
• незащищённые половые контакты;
• синдром Рейтера;
• частая смена половых партнеров;
• ректальные стриктуры;
• коньюнктивит;
• пневмонии у детей или у лиц со сниженным иммунитетом;
• фарингит;
• бронхиолит у детей.

Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4–6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.
Интерпретация результатов
Единицы измерения: УЕ*

Положительный результат будет сопровождаться дополнительным комментарием с указанием коэффициента позитивности пробы (КП*):

• КП >= 11,0 — положительно;
• КП <= 9,0 — отрицательно;
• КП 9,0–11,0 — сомнительно.

При положительном результате выдается значение коэффициента позитивности.*
Положительный результат:

• хламидиоз, инфицирование произошло не менее 3–4 недель назад;
• инфекция излечена, первые 3–9 месяцев после окончания лечения;
• внутриутробная инфекция возможна.

Отрицательный результат:

• инфекция не обнаружена;
• инфицирование хламидиозом прошло менее 3–4 недель назад;
• излеченный хламидиоз, лечение окончено более 9 месяцев назад.

Сомнительный результат(околопороговая концентрация антител):

• низкий уровень антител;
• неспецифические сывороточные интерференции. Рекомендуется повторить исследование.

* Коэффициент позитивности (КП) — это отношение оптической плотности пробы пациента к пороговому значению. КП — коэффициент позитивности является универсальным показателем, применяемым в иммуноферментных тестах. КП характеризует степень позитивности исследуемой пробы и может быть полезен врачу для правильной интерпретации полученного результата. Поскольку коэффициент позитивности не коррелирует линейно с концентрацией антител в пробе, не рекомендуется использовать КП для динамического наблюдения за пациентами, в том числе контроля эффективности лечения.

Общая характеристика

Хламидии – это микроорганизмы, занимающие промежуточное положение между вирусами и риккетсиями, которые являются облигатными внутриклеточными паразитами с уникальным циклом развития (внеклеточные (элементарное тельце) и внутриклеточные (инициальные тельца) формы микроорганизма). В настоящее время известны четыре вида хламидий: Chl.trachomatis, Chl. pneumonia, Chl. Psittaci, Chl. pecorum. Chl.trachomatis – является возбудителем урогенитального хламидиоза, который характеризуется поражением слизистой половых путей и коньюктивы. При инфицировании организм начинает продуцировать специфические IgG к Chl.trachomatis, которые определяют, начиная с третьей недели после инфицирования и сохраняются пожизненно, не обеспечивая стойкого имунитета. Свидетельствуют о наличии перенесенной или текущей инфекции. Уровень зависит от активности процесса и частоты реактивации возбудителя.Используют для скрининга наличия инфицирования данным видом хламидий.

Хламидиоз, качественное определение

Хламидиозы — разнообразные по патогенезу и клиническим проявлениям заболевания людей и животных. Наибольшее значение в последние годы приобрели урогенитальные хламидийные инфекции, относящиеся к инфекциям, передаваемым половым путем, которые вызываются Chlamydia trachomatis. Они поражают мужчин и женщин, регистрируются у детей и новорожденных, оказывают негативное влияние на репродуктивное здоровье и часто являются причиной бесплодия.

Вид Chlamydia trachomatis относится роду Chlamydiacae, семейству Chlamydiacea, порядку Chlamydiales.

Chlamydia trachomatis – грамотрицательные бактерии с облигатным внутриклеточным энергозависимым паразитизмом и уникальным циклом развития, проявляющие тропизм к клеткам цилиндрического эпителия.

Защитная реакция организма-хозяина на начальной стадии инфекции осуществляется при участии полиморфноядерных лимфоцитов. Существенную роль в защите организма играет поликлональная активация В-лимфоцитов. В сыворотке крови и секреторных жидкостях при хламидиозе обнаруживаются иммуноглобулины классов IgМ, IgА, IgG. Однако ведущую роль в защите от хламидийной инфекции все-таки занимают Т-хелперы, активирующие фагоцитарную активность макрофагов.

Урогенитальный хламидиоз — антропонозная инфекция: ее источником служат больные люди (хламидии не являются представителями нормальной микрофлоры, поэтому их обнаружение у здоровых людей является доказательством хронического бессимптомного течения хламидиоза). Основной механизм заражения — контактный, путь передачи — половой. Однако возможно инфицирование через различные предметы (белье, мочалки и др.). Новорожденные могут заразиться от больной матери при прохождении через родовые пути. Возможна также трансплацентарная передача возбудителя от матери плоду в процессе его внутриутробного развития.

Восприимчивость к болезни высокая.

Экологической нишей хламидийной инфекции является цилиндрический эпителий шейки матки, уретра и прямая кишка.

В настоящее время насчитывается более 20 нозологических форм, ассоциированных с хламидийной инфекцией. Особенностью урогенитального хламидиоза является как разнообразие клинических проявлений, так и отсутствие выраженной симптоматики. Заболевание, как правило протекает мало- или асимптомно, что обусловлено своеобразием биологии C. trachomatis, уникальным жизненным циклом и взаимодействием с клетками организма хозяина. Известно, что из 10 заболевших хламидиозом, не более чем у трех инфекция протекает по типу острого воспалительного процесса и имеет клинические проявления, т.е. классификация урогенитального хламидиоза на острую и хроническую формы достаточно условна. Следует учитывать, что манифестные заболевания регистрируются, главным образом, в том случае, когда имеет место ассоциированная инфекция, и именно ассоциант (гонококк, трихомонада идр.) обусловливает развитие клинической картины инфекционного процесса, и/или на фоне угнетения иммунного ответа со стороны макроорганизма.

Согласно международной классификации болезней (МКБ-10) выделены следующие клинические формы урогенитального хламидиоза (УГХ):

1. УГХ органов малого таза и других отделов мочеполовой системы:

• эндометрит;
• эндомиометрит;
• сальпингит;
• оофорит;
• цистит;
• эпидидимит;
• орхит;
• простатит;
• везикулит.

2. Экстрагенитальная хламидийная инфекция:

• пневмония;
• конъюнктивит;
• фарингит;
• назофарингит;
• артрит;
• перигепатит;
• хламидийная инфекция аноректальной области.

Несмотря на разнообразие распространения хламидийной инфекции в организме больного, их реализация может быть достигнута при условии несостоятельности защитно-биологических барьеров организма.

В любом варианте развития и распространения урогенитальной инфекции: каналикулярно, лимфогенно, гематогенно, с участием сперматозоидов, при внутриматочных вмешательствах с лечебной или диагностичесской целью и других, — возможно вовлечение в воспалительный процесс органов малого таза. Хронические вялотекущие процессы на уровне матки и/или придатков могут, в свою очередь, привести к еще более серьезным осложнениям — бесплодию, внематочной беременности, привычные выкидыши на ранних сроках.

Крайне желательно, при установлении диагноза обладать комплексной клинической, эпидемиологической информацией, а с диагностической целью должны быть исключены возможные бактериальные и вирусные инфекции, заболевания, вызванные трихомонадными и другими простейшими, имеющие аналогичные клинические проявления, а также сочетанные инфекции урогенитального тракта.

Хламидийная инфекция мужчин обычно протекает в виде легкого негонококкового неспецифического воспаления мочеиспускательного канала, продолжающегося несколько месяцев. При остром воспалительном процессе клиническая картина мало отличается от гонококковой инфекции, а при хроническом – клинические проявления зависят от степени вовлечения в воспалительный процесс мочеполовой системы: наряду с уретритом могут наблюдаться простатит, везикулит, орхоэпидидимит, фуникуллит. При хроническом хламидийном уретрите мужчин часто встречается мягкий инфильтрат переднего и заднего отделов уретры и колликулит.

Известно, что инфицирование беременной женщины хламидиями представляет опасность, как для матери, так и для плода, к которой относят нарушение физиологического течения беременности, преждевременные роды, послеродовые осложнения и патологию плода.

На основании особенностей жизненного цикла хламидий, строения микроорганизма и его взаимодействия с клетками макроорганизма, вызывающнго мало — или асимптомное течение инфекции, часто характеризующейся персистентной или латентной формами заболевания со множеством клинических проявлений, можно сделать заключение о том, что в подавляющем большинстве случаев единственным достоверным критерием существования урогенитального хламидиоза являются результаты лабораторных исследований.

Для диагностики хламидиозной инфекции используют прямые (культуральные и молекулярно-генетические) и косвенные (определение специфических антител) методы диагностики.

Хламидии (Chlamydia trachomatis), определение ДНК

Качественное определение ДНК Chlamydia trachomatis методом ПЦР.

Особенности возбудителя Chlamydia trachomatis обуславливают его низкую иммуногенность, вследствие чего у 50% инфицированных антитела не обнаруживаются. Поэтому определение антител к Chlamydia trachomatis является вспомогательным тестом, и для верификации хламидиоза (особенно в сомнительных случаях, при отсу­тствии сероконверсии) используются такие высокочувствительные и специфичные прямые методы, как обнаружение ДНК Chlamydia trachomatis в клинических образцах методом ПЦР.

Аналитические показатели: Определяемый фрагмент — участки последователь­ности гена криптической плазмиды C.trachomatis; специфичность обнаружения — 99%. Чувствительность анализа — не менее 100 копий ДНК-матрицы молекул криптической плазмиды C.trachomatis в 5 мкл прошедшей обработку (выделение ДНК) пробы.